8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶对维持基因组稳定性至关重要，其活性异常可扰乱DNA损伤修复并增加致癌致畸风险。本文构建基于CRISPR-Cas的荧光生物传感器，用于快速灵敏检测8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶。该传感器采用发夹探针，将二次链置换扩增（SDA）与CRISPR/Cas12a效应器结合，40 min内等温完成。酶存在时，PNK辅助...
寡核苷酸适配体可通过引入一段通常带标记的互补短寡核苷酸，转化为结构切换型生物传感器；靶标结合会破坏适配体与标记互补链之间的杂交平衡，从而产生与靶标浓度相关的信号。尽管该机制对传感器性能至关重要，多数结构切换适配体的分析物响应机制仍不清楚。本文采用单分子荧光成像研究标记互补寡核苷酸与未标记小分子靶标 L-酪氨酰胺（L-Tym）同 L-...
mRNA 周转在转录后基因表达调控中起重要作用，但单细胞内 mRNA 周转的时空动态仍缺乏基本理解。为克服这一限制，作者开发了 TREAT 生物传感器，利用单 RNA 成像区分完整报告转录本和稳定的降解中间体。本文提出一套图像分析流程，用于半自动检测和追踪单个 mRNA 颗粒。该流程首先对齐双通道图像序列，生成细胞质感兴趣区域，然后...
定量荧光显微技术常用于回答基础生物学问题。单分子RNA成像方法使研究者能够在活细胞中直接观察mRNA生命周期的初始步骤，但调控mRNA翻译的动态机制仍不清楚。作者开发了一种RNA生物传感器，可在活细胞中以时空分辨方式评估单个mRNA转录本的翻译状态。TRICK（translating RNA imaging by coat prot...
信使核糖核酸（mRNA）在细胞内的生命周期具有高度动态性。单分子荧光显微成像技术的发展使研究者能够在活细胞中直接观察 RNA 的代谢过程，而活细胞多色 RNA 成像的进步进一步提高了对 RNA 代谢细节的解析能力。本章概述了翻译 RNA 成像衣壳蛋白敲除（TRICK）RNA 生物传感器的设计与实施方法。TRICK 利用核糖体在首轮翻...
活细胞单分子分析为基本生物学过程动力学提供了定量见解，但信使RNA（mRNA）翻译的动态过程仍未得到充分解析。作者开发了一种基于荧光显微镜的RNA生物传感器技术，用于报告单个mRNA分子的首轮翻译事件。该技术利用正交噬菌体PP7和MS2茎环分别标记报告转录本的编码区和3′非翻译区，并分别结合带核定位序列的PP7衣壳蛋白-GFP（NL...