Engineered Biosensors from Dimeric Ligand-Binding Domains.
生物传感器是合成生物学和代谢工程应用中的重要组成部分。本文报道了基于失稳二聚体配体结合域的第二代酿酒酵母地高辛和孕酮生物传感器，其通过配体诱导稳定发挥作用。该生物传感器由一个配体结合域单体融合 DNA 结合域、另一个融合转录激活域组成，在配体结合和受体二聚化后激活报告基因表达。在二聚界面引入失稳突变使生物传感器动态范围提高一个数量级...
A Biosensor Strategy for E. coli Based on Ligand-Dependent Stabilization.
工程化微生物以监测环境化学物质或生产目标生物产品通常依赖合适的生物传感器，但将配体结合蛋白转化为生物传感器较为困难。本文报道了一种在大肠杆菌中构建生物传感器的一般策略：利用配体依赖性稳定转录激活蛋白，实现报告基因表达随配体浓度变化。作者以 LacI 作为配体结合域，将其与 Zif268 DNA 结合域和 RNA 聚合酶 ω 亚基 R...
A dual system using compartmentalized partnered replication for selection of arsenic-responsive transcriptional regulator.
本文提出一种用于筛选砷响应转录调控因子的正负双选择系统。首先，作者构建了以大肠杆菌 BL21(DE3) 为宿主、以 ArsR 转录调节蛋白和 GFP 报告基因为核心的全细胞生物传感器，用于检测液相样品中的亚砷酸盐 As(III)。该传感器采用双质粒系统：pET29-arsR 在 T7 启动子控制下表达 ArsR，pACYC-gfp ...
Directed Evolution of Membrane Transport Using Synthetic Selections.
膜转运体的功能与底物特异性研究受限于实验数据不足，且序列-功能关系难以预测。本文利用配体响应型生物传感器系统，将底物摄取与大肠杆菌生长偶联：只有当细胞表达能转运特定配体的转运体时，配体进入细胞并磷酸化为硫胺素焦磷酸（TPP），TPP 结合核糖开关，启动抗生素抗性基因表达，使细胞在抗生素选择培养基中存活。作者将该合成选择系统用于定向进...
Directed Evolution to Engineer Monobody for FRET Biosensor Assembly and Imaging at Live-Cell Surface.
监测细胞表面酶活性具有挑战性，因为基于荧光共振能量转移（FRET）的生物传感器在转运和膜整合方面效率较低。为此，作者开发了一种供体与受体分离、可在原位组装的混合生物传感器。通过整合定向进化与序列-功能分析，作者工程化了一种 monobody 变体 PEbody，使其能够特异性结合藻红蛋白 R-PE。PEbody 可用于可视化细胞间连...
Development of Transcription Factor-Based Designer Macrolide Biosensors for Metabolic Engineering and Synthetic Biology.
大环内酯是一类具有广泛强效生物活性的天然产物，由 I 型聚酮合酶（PKS）及相关酶机器生物合成。药物发现、药物生产和探针开发迫切需要获取大环内酯及其非天然衍生物。通常，在不同微生物宿主中工程化大环内酯及其类似物生物合成的努力，受限于大环内酯生物合成途径的复杂性，以及我们理性重编程 I 型 PKS 和 PKS 后修饰机器的能力有限。基...