泛素化是维持正常细胞功能的关键通路，其异常可导致细胞功能障碍并引发多种疾病。筛选和开发靶向泛素化级联的小分子抑制剂需要快速、稳健的检测方法。目前检测泛素化的常用技术包括荧光、分光光度、化学发光、核磁共振和放射性示踪，其中 Western blot 最常用，但耗时长且难以用于精细时间过程研究。本文提出利用生物层干涉仪（BLI）实时、快...
线粒体中超过一千种蛋白大多由核基因编码，需从胞质导入。由于缺乏在活细胞中评估该过程的工具，胞质事件如何调控线粒体蛋白导入仍不清楚。作者构建了一种可诱导、基于生物发光定量读出的分子生物传感器，用于监测主要的前序列介导线粒体蛋白导入通路。该探针由可切除的线粒体靶向信号、RGFP、RLuc及条件性不稳定域组成，只有在线粒体基质中切除靶向信...
泛素化是由泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）和泛素连接酶（E3）依次参与的级联反应，调控蛋白降解、DNA 修复和信号转导等过程。E2 酶活性与白血病、乳腺癌、肺癌和结直肠癌等多种疾病相关，但由于其处于复杂酶级联中，E2 活性的监测对癌症诊断具有挑战性。为克服这一难题，作者提出一种基于人工 RING 指蛋白（ARF）的新型 E2 ...
近期以泛素受体Rpn10蛋白酶体亚基为亲和配体对小鼠脑制备物进行蛋白组学分析，鉴定出一组可结合Rpn10的蛋白。本研究利用Biacore-3000光学生物传感器，定量考察Rpn10与其中GAPDH、丙酮酸激酶及组蛋白H2A、H2B的相互作用。结果表明，固定在CM5芯片上的Rpn10可与GAPDH和丙酮酸激酶发生定量亲和结合，Kd分别...
蛋白泛素化中的泛素结合酶（E2）与白血病、肺癌和乳腺癌等多种疾病相关，但目前尚缺乏快速准确检测 E2 酶活性的方法。本文报道了一种基于信号累积型离子敏感场效应晶体管（ISFET）生物传感器（AMIS 传感器）并利用人工 RING 指（ARF）检测 E2 活性的方法。ARF 的使用使 E2 活性检测无需外源底物，从而简化了检测流程。通...
代谢型γ-氨基丁酸B受体（GABAB）细胞表面稳定性调控机制仍不清楚。与许多G蛋白偶联受体不同，GABAB不经历激动剂促进的内吞，而是组成性内吞并快速下调。作者以GABAB(1b)第二胞内环为诱饵进行酵母双杂交筛选，鉴定出泛素特异性蛋白酶14（USP14）与其相互作用。利用生物发光共振能量转移（BRET）泛素化探针，在活细胞中检测到...
受体酪氨酸激酶（RTK）的自催化磷酸化可产生多样、依赖细胞环境的信号响应，但也带来配体非依赖的自主激活风险。作者构建了一种遗传编码的构象生物传感器 LIFEA2，用于在活细胞中实时报告 EphA2 激酶活性。该传感器将单体柠檬黄 mCitrine 插入 EphA2 近膜区（JMS），并将单体樱桃 mCherry 融合于 C 端，通过...