Development of an RNA aptamer as a therapeutic agent for synucleinopathies.
α-突触核蛋白（αSyn）的聚集与帕金森病、多系统萎缩和路易体痴呆等突触核蛋白病发病相关。αSyn 序列中的 KTKEGV 假重复（KR）是其类朊病毒样传播和神经退化的关键介导因素。目前尚无有效延缓疾病进展的治疗手段。本研究通过体外筛选获得一个 77 核苷酸 RNA 适配体 1R6，其以高亲和力和选择性结合 αSyn1-95。1R6...
Real-time bio-layer interferometry ubiquitination assays as alternatives to western blotting.
泛素化是维持正常细胞功能的关键通路，其异常可导致细胞功能障碍并引发多种疾病。筛选和开发靶向泛素化级联的小分子抑制剂需要快速、稳健的检测方法。目前检测泛素化的常用技术包括荧光、分光光度、化学发光、核磁共振和放射性示踪，其中 Western blot 最常用，但耗时长且难以用于精细时间过程研究。本文提出利用生物层干涉仪（BLI）实时、快...
Biolayer interferometry for DNA-protein interactions.
生物层干涉仪（BLI）是一种广泛用于实时测定大分子相互作用动力学的技术。该技术通过检测生物传感器尖端反射白光干涉图案的变化，可测定蛋白-蛋白（如抗体-底物动力学）或蛋白-小分子（如药物发现）相互作用的结合参数。然而，BLI 在 DNA-蛋白相互作用研究中的应用较少受到重视。DNA 结合蛋白在细胞生物学中发挥重要作用，调控转录、DNA...
Fibronectin binding to von Willebrand factor occurs via the A1 domain.
背景：胶原与血管性血友病因子（von Willebrand factor, VWF）的相互作用在止血启动中发挥重要作用。目的：作者假设除胶原外，纤连蛋白（fibronectin）等细胞外基质（ECM）蛋白也可能结合 VWF。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆来源及含特定结构域变异的重组 VWF 与纤连蛋白的相互作用；通...
Biolayer interferometry-SELEX for Shiga toxin antigenic-peptide aptamers & detection via chitosan-WSe
报道基于生物层干涉仪（BLI）的体外筛选技术（BLI-SELEX），通过表位肽快速筛选针对大肠杆菌志贺毒素亚型 stx1 和 stx2 的特异性适配体。BLI-SELEX 可在微孔板格式中一步生成针对蛋白生物标志物的适配体，避免传统 SELEX 多轮富集。筛选得到两个独特适配体，对 stx1 和 stx2 的解离常数分别约 47 p...
Measuring ligand efficacy at the mu-opioid receptor using a conformational biosensor.
作用于G蛋白偶联受体（GPCR）的正构配体的内在效能反映其稳定活性受体状态（R*）的能力，是决定其生理效应的主要因素。本文提出一种直接量化配体效能的方法：利用干涉仪测量R*特异性生物传感器与纯化受体的结合。以典型A类GPCR µ-阿片受体（µ-OR）及其活性态传感器纳米抗体39（Nb39）为例，证明不同配体招募Nb39至µ-OR的能...
Mapping and Quantitation of the Interaction between the Recombination Activating Gene Proteins RAG1 and RAG2.
RAG1 和 RAG2 是 V(D)J 重组的关键蛋白，RAG2 与 RAG1 的相互作用对催化功能至关重要，但机制不清。作者利用生物层干涉仪（BLI）和 pull-down 实验鉴定 RAG1 上与 RAG2 结合所需的区域，并测得 RAG1-RAG2 结合常数约 0.4 μM。以 Hermes 转座酶为参考，作者构建了约 36 ...