10.1101/2025.01.06.631605
由于缺乏在体内检测受体活性的工具，研究者难以全面解析受体水平对发育模式形成的调控。本文将一类新型受体酪氨酸激酶（RTK）活性生物传感器 pYtag 系统扩展到果蝇，用于可视化内源 RTK 活性。作者通过 CRISPR/Cas9 在 Torso、EGFR 和 Breathless（Btl）三个果蝇 RTK 的 C 端内源插入 3 拷贝...
pYtags enable spatiotemporal measurements of receptor tyrosine kinase signaling in living cells.
受体酪氨酸激酶（RTK）是多细胞动物中重要的信号枢纽，参与细胞增殖、迁移和分化。然而，目前缺乏在单个活细胞中定量测量特定 RTK 活性的工具。本文提出 pYtag，一种模块化活细胞显微成像方法，用于监测用户指定 RTK 的活性。pYtag 由经酪氨酸激活基序修饰的 RTK 组成；该基序被磷酸化后，可高特异性招募荧光标记的串联 SH2...
Revealing β-TrCP activity dynamics in live cells with a genetically encoded biosensor.
F-box蛋白β-转导重复蛋白（β-TrCP）是SCF E3泛素连接酶复合物的底物适配体，在细胞生理中起关键作用，并在多种癌症中常发生失调。本文开发了一种荧光生物传感器，用于在活单细胞中实时定量测量β-TrCP活性。研究发现，β-TrCP在整个细胞周期中保持组成型活性，并维持其底物处于明确的稳态水平。β-TrCP表达水平与其活性之间...
A gain-of-functional screen identifies the Hippo pathway as a central mediator of receptor tyrosine kinases during tumorigenesis.
Hippo通路是调控器官大小、组织稳态和肿瘤发生的关键信号通路，但其上游激酶和胞外调控因子仍不清楚。本研究利用受体酪氨酸激酶（RTK）过表达文库和Hippo信号活性生物传感器，首次系统开展RTK调控Hippo通路的获得性功能筛选。结果显示，多数RTK可调控Hippo信号活性。作者进一步表征TAM家族（TYRO3、AXL、MERTK）...
Monitoring activities of receptor tyrosine kinases using a universal adapter in genetically encoded split TEV assays.
受体酪氨酸激酶（RTKs）在细胞间通讯、增殖分化、存活和组织稳态等细胞生物学过程中发挥关键作用，并与癌症和神经发育障碍等疾病相关。配体激活的 RTK 通过 RTK 上的磷酸酪氨酸（p-Tyr）基序和适配体蛋白中的磷酸酪氨酸结合域（如 SH2 域）招募适配体蛋白。由于 RTK/适配体组合众多，标准化比较受体活性具有挑战。本文在细胞实验...
Characterizing Dynamic Protein-Protein Interactions Using the Genetically Encoded Split Biosensor Assay Technique Split TEV.
动态蛋白-蛋白相互作用（PPIs）是细胞信号传导的基本组成，监测其调控有助于理解健康与疾病中的信号机制。基因编码的分裂蛋白生物传感器检测法（split biosensor assay, SBA），如 split TEV 方法，在研究活细胞中受调控的 PPIs 时具有重要价值。Split TEV 基于两个原本无活性的 TEV 蛋白酶片...
Ubiquitination switches EphA2 vesicular traffic from a continuous safeguard to a finite signalling mode.
受体酪氨酸激酶（RTK）的自催化磷酸化可产生多样、依赖细胞环境的信号响应，但也带来配体非依赖的自主激活风险。作者构建了一种遗传编码的构象生物传感器 LIFEA2，用于在活细胞中实时报告 EphA2 激酶活性。该传感器将单体柠檬黄 mCitrine 插入 EphA2 近膜区（JMS），并将单体樱桃 mCherry 融合于 C 端，通过...
Receptor tyrosine kinase signaling: regulating neural crest development one phosphate at a time.
受体酪氨酸激酶（RTKs）结合细胞表面的一类生长因子，并通过胞内酪氨酸激酶结构域及磷酸化调控序列介导广泛发育与出生后细胞过程。激活后，RTKs 招募含 SH2 或 PTB 结构域的信号分子，形成多蛋白复合物，调控增殖、存活、凋亡、迁移、分化、代谢、转录等反应。本章重点阐述 ErbB、Eph、FGF、Kit、MET、MuSK、PDGF...
BRET Biosensor Analysis of Receptor Tyrosine Kinase Functionality.
生物发光共振能量转移（BRET）是用于分析生物分子蛋白相互作用的改进型共振能量转移技术。BRET可应用于多种跨膜受体，但早期文献多集中于G蛋白偶联受体（GPCR），而用于受体酪氨酸激酶（RTK）活性研究的报道相对有限。这一现象令人意外，因为RTK常以二聚化作为激活关键，并且是癌症、糖尿病、神经退行性和呼吸系统疾病的重要治疗靶点。本综...
Domain-based biosensor assay to screen for epidermal growth factor receptor modulators in live cells.
传统药物发现主要依赖重组激酶筛选，导致许多受体酪氨酸激酶（RTK）抑制剂在细胞中活性不佳。为在天然环境中筛选 RTK 调节剂，作者将一种绿色荧光蛋白（GFP）标记的 Src 同源 2 结构域（SH2）生物传感器引入 A549 细胞，作为内源表皮生长因子受体（EGFR）活性的替代报告系统。受体被激活后，通过活细胞中形成的绿色荧光颗粒数...