Neo-Cysteine Molecular Glues for Targeting Mutated SMAD4 Protein.
由遗传突变编码的新氨基酸残基所引导的新蛋白-蛋白相互作用（neoPPIs）是精准医学的有前景靶点。小分子可模拟突变效应，形成新表面并作为分子胶介导neoPPIs，重编程生物回路。基因组改变与化学干预的结合凸显了利用新氨基酸残基导向分子胶靶向疾病相关突变的策略。其中，位于蛋白-蛋白相互作用界面的新半胱氨酸为开发共价分子胶提供独特机会。...
Development of a V5-tag-directed nanobody and its implementation as an intracellular biosensor of GPCR signaling.
蛋白-蛋白相互作用（PPI）是细胞信号网络的基础。由于PPI高度动态，细胞检测常能更真实地反映生物学环境，但不同PPI检测之间可能出现不一致，部分原因在于将荧光蛋白或酶等大功能模块融合到目标蛋白上，会扰动其稳定性、亚细胞定位和相互作用。表位标签体积较小，扰动较低，但通常缺乏体内可追踪性和功能。本文开发了结合V5标签的细胞内纳米抗体N...
Proteomic Profiling of Mouse Brain Pyruvate Kinase Binding Proteins: A Hint for Moonlighting Functions of PKM1?
亲和蛋白质组学广泛用于鉴定参与多种互作组形成的蛋白。蛋白-蛋白相互作用可反映特定蛋白在细胞中的功能，对多功能蛋白尤其重要。丙酮酸激酶（PK）是催化糖酵解最后一步的经典酶，存在PKM1、PKM2、PKL和PKR四种亚型。PKM2在增殖细胞中表达并具有多种非经典“月光”功能，而主要在成人分化组织表达的PKM1缺乏明确记录的月光功能。为评...
Kinase Sensing Based on Protein Interactions at the Catalytic Site.
激酶在细胞生长、增殖等关键细胞过程中发挥调控作用，因此可作为多种疾病（包括多种癌症）发生与预后的潜在生物标志物。现有激酶生物传感器，包括电化学和放射性方法，通常依赖ATP依赖的酶促磷酸化反应进行传感。本文提出一种新型基于相互作用的电化学激酶生物传感器，无需任何化学标记或修饰。其传感基础是激酶催化位点与其底物磷酸化位点之间的蛋白-蛋白...
Determination of the Protein-Protein Interactions within Acyl Carrier Protein (MmcB)-Dependent Modifications in the Biosynthesis of Mitomycin.
丝霉素具有独特化学结构，含有密集官能团并具强抗肿瘤活性。此前提出的丝霉素C生物合成途径引起关注。本文聚焦于确定酰基载体蛋白（ACP）依赖的修饰步骤，并鉴定丝霉素C早期生物合成中MmcB（ACP）与其伙伴蛋白之间的蛋白-蛋白相互作用。基于基因敲除与互补实验，鉴定mitE、mmcB、mitB和mitF为丝霉素C生物合成必需功能基因。生化...
Using Biosensors to Study Protein-Protein Interaction in the Hippo Pathway.
Hippo信号网络依赖蛋白-蛋白相互作用（PPI）传递信号，调控器官大小、细胞增殖与分化、肿瘤发生等过程。当前研究旨在解析上游Hippo组分的复杂调控并寻找癌症治疗靶点，但亲和纯化质谱（AP-MS）等传统方法尚不足以实现这些目标。本综述介绍近期利用荧光素酶生物传感器研究Hippo通路的新方法。这些传感器可在体外使用纯化传感器蛋白，也...
An Approach for the Real-Time Quantification of Cytosolic Protein-Protein Interactions in Living Cells.
近年来，细胞基检测广泛用于分子相互作用分析，可补充传统生化与生物物理方法，在生理相关条件下进行相互作用分析、作用机制研究和药物筛选。多数细胞检测需标记生物分子以获得特异性。为克服标记法缺点，作者此前提出“细胞基 molography（分子衍射术）”作为生物传感器，用于分析活细胞中涉及天然膜受体的特定分子相互作用。本文将该方法扩展到胞...
Insertion state of modular protein nanopores into a membrane.
过去十年，蛋白纳米孔发展迅速，但仍需开发能在膜外采样生物分子事件的、带有较大功能基团的纳米孔。本文设计、制备并分析了一类包含单体β-桶膜蛋白截短体的模块化蛋白纳米孔。通过不同长度的柔性肽连接子，将一个外源稳定折叠蛋白锚定在水相中。作者利用蛋白质工程和单分子电生理广泛考察了这些模块化蛋白纳米孔的成孔特性。研究发现，将外源蛋白连接至 N...
Förster Resonance Energy Transfer Based Biosensor for Targeting the hNTH1-YB1 Interface as a Potential Anticancer Drug Target.
Y-box结合蛋白1（YB1）是公认的肿瘤转移标志物，其高表达和核定位与多种肿瘤的侵袭性、药物耐药及患者不良预后相关。在细胞核内，YB1与DNA糖基化酶人内切酶III（hNTH1）相互作用并调节其活性。本研究利用Förster共振能量转移（FRET）和AlphaLISA技术进一步表征hNTH1与YB1的相互作用，并确定形成复合物所需...
Development and Applications of Superfolder and Split Fluorescent Protein Detection Systems in Biology.
绿色荧光蛋白（GFP）经分子工程改造为稳定且折叠鲁棒的超级折叠GFP（sfGFP），显著推动了生物传感器开发和荧光标记在生物学中的应用。基于sfGFP的自组装双片段split-FP系统被广泛用于在体外监测可溶性蛋白表达，并在细胞内追踪蛋白定位与转运。近年来发展的三片段split-FP系统依赖三个GFP片段的自组装，尤其适合检测蛋白-...
A large-scale comparative analysis of affinity, thermodynamics and functional characteristics of interactions of twelve cytochrome P450 isoforms and their redox partners.
本研究旨在利用12种细胞色素P450（CYP）异构体及其两种氧化还原伙伴——NADPH依赖性细胞色素P450还原酶（CPR）和肾上腺素蛋白（Adx），比较P450依赖性线粒体（mit）与微粒体（mic）单加氧酶系统中蛋白-蛋白相互作用的亲和力和热力学差异。采用Biacore 3000表面等离子共振（SPR）生物传感器测定平衡解离常数...
Split Green Fluorescent Proteins: Scope, Limitations, and Outlook.
许多蛋白质可被裂解为若干片段，这些片段在无需共价连接的情况下可自发重组为具有功能的完整蛋白。对于分裂绿色荧光蛋白（split GFPs），片段重组会恢复或形成荧光读出，因此被广泛用于研究蛋白质-蛋白质相互作用。本文综述了分裂GFP方法的适用范围与主要局限，包括片段互补的不可逆性、荧光出现的时间延迟、片段非特异性自组装造成的背景，以及...
High-Throughput, Biosensor-Based Approach to Examine Bone Morphogenetic Protein (BMP)-Receptor Interactions.
骨形态发生蛋白（BMP）与其相应细胞表面受体的结合是启动BMP信号级联反应的关键步骤，因此明确哪些BMP–受体复合物能够形成，对于理解特定BMP的生理功能至关重要。本文介绍了一种基于表面等离子共振（SPR）的高通量方法，用于快速鉴定和评价BMP–受体复合物。该方法将受体的胞外BMP结合域制备为人IgG1-Fc融合蛋白，利用Fc片段将...
High-Content Screening Campaign to Identify Compounds That Inhibit or Disrupt Androgen Receptor-Transcriptional Intermediary Factor 2 Protein-Protein Interactions for the Treatment of Prostate Cancer.
约20%前列腺癌（PCa）患者会进展为不可治愈的去势抵抗性前列腺癌（CRPC），雄激素受体（AR）共激活因子转录中介因子2（TIF2）过表达与不良预后相关。本研究将AR-TIF2蛋白-蛋白相互作用生物传感器（PPIB）高内容筛选（HCS）应用于143,535个化合物，筛选能抑制双氢睾酮（DHT）诱导的AR-TIF2相互作用形成或破坏...
Photoswitchable peptide-based 'on-off' biosensor for electrochemical detection and control of protein-protein interactions.
神经元一氧化氮合酶（nNOS）通过与α-突触蛋白（α-syntrophin）的PDZ结构域相互作用，催化关键细胞信号分子一氧化氮（NO）生成。本研究开发了一种新型光驱动光开关肽基生物传感器，其结构模拟nNOS β-指区，用于检测并调控其与α-突触蛋白的相互作用。将偶氮苯光开关引入肽骨架，可在无二级结构的反式光稳态与具有明确反平行β-...
Multidimensional Control of Cas9 by Evolved RNA Polymerase-Based Biosensors.
以时空精度控制Cas9的系统可减少副作用、保护敏感组织，并实现仅在特定时间和地点激活的基因治疗。本文提出基于RNA聚合酶（RNAP）生物传感器的新型Cas9控制器设计，通过产生向导RNA（gRNA）来调控目标基因敲除。作者首先开发并验证了新的脱落酸（ABA）诱导生物传感器用于控制Cas9，随后利用噬菌体辅助连续进化（PACE）降低系...
QCM Biosensor Based on Polydopamine Surface for Real-Time Analysis of the Binding Kinetics of Protein-Protein Interactions.
本文开发了一种基于聚多巴胺（PDA）表面的石英晶体微天平（QCM）生物传感器，用于实时分析蛋白质-蛋白质相互作用的结合动力学。传感器制备过程简单：将金传感器芯片浸入pH 8.5的多巴胺水溶液中，多巴胺自聚合并在芯片表面自发沉积形成PDA薄膜；随后将蛋白孵育于PDA表面，通过Michael加成和/或Schiff碱反应将其共价固定。研究...
Isatin-induced increase in the affinity of human ferrochelatase and adrenodoxin reductase interaction.
异吲哚啉酮（isatin，indol-2,3-dione）是一种内源性非肽类调节分子，具有多种生物学与药理学活性，但其分子机制尚不清楚。在哺乳动物脑和肝中鉴定出多种异吲哚啉酮结合蛋白，提示其可能影响这些蛋白功能。作者假设异吲哚啉酮除直接作用于特定蛋白靶点外，还可作为蛋白-蛋白相互作用（PPI）的调节因子。基于表面等离子共振（SPR）...
Characterizing Dynamic Protein-Protein Interactions Using the Genetically Encoded Split Biosensor Assay Technique Split TEV.
动态蛋白-蛋白相互作用（PPIs）是细胞信号传导的基本组成，监测其调控有助于理解健康与疾病中的信号机制。基因编码的分裂蛋白生物传感器检测法（split biosensor assay, SBA），如 split TEV 方法，在研究活细胞中受调控的 PPIs 时具有重要价值。Split TEV 基于两个原本无活性的 TEV 蛋白酶片...
Thermodynamics of interactions between mammalian cytochromes P450 and b5.
细胞色素P450（CYPs）在外源物和内源底物代谢中起重要作用。作为微粒体单加氧酶系统的关键组分，CYPs参与多种蛋白-蛋白相互作用。然而，单加氧酶系统组分间分子相互作用机制仍需进一步表征。本研究采用基于表面等离子共振（SPR）的生物传感器Biacore 3000，评估哺乳动物CYP与细胞色素b5（CYB5）成对相互作用的热力学参数...