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Rapid parallel measurements of macroautophagy and mitophagy in mammalian cells using a single fluorescent biosensor.

Scientific reports 2015 Sargsyan A, Cai J, Fandino LB, Labasky ME 等 8 人

线粒体功能障碍与多种人类疾病及正常衰老相关,其稳态依赖线粒体自噬(mitophagy)介导的受损线粒体向溶酶体转运与降解。线粒体自噬依赖巨自噬(macroautophagy),但本身是选择性过程,可在特定条件下与巨自噬解耦,因此需同时并分别评估两者。作者开发了一种基于流式细胞术(FCM)的高通量定量方法,利用单一荧光蛋白生物传感器 ...

Phage-Based Fluorescent Biosensor Prototypes to Specifically Detect Enteric Bacteria Such as E. coli and Salmonella enterica Typhimurium.

PloS one 2015 Vinay M, Franche N, Grégori G, Fantino JR 等 6 人

水安全是公共卫生和自然环境保存的重大关切。本文提出利用噬菌体开发能够检测水中人和动物病原体的生物传感器工具。为此,作者利用噬菌体的高度区分性,使其特异性感染细菌宿主。关键挑战在于使用荧光报告蛋白,该蛋白只有在基因改造温和噬菌体与其细菌宿主发生特异性识别后才合成并被检测。为保证准确性和执行速度,作者开发了无需细菌生长的检测流程,仅需1...

A direct screen for c-di-GMP modulators reveals a Salmonella Typhimurium periplasmic ʟ-arginine-sensing pathway.

Science signaling 2015 Mills E, Petersen E, Kulasekara BR, Miller SI

环二鸟苷酸(c-di-GMP)是细菌第二信使,传递内外信号并调控运动性与生物膜形成。许多细菌编码上百种 c-di-GMP 调节酶,但只有少数酶的活性信号被明确。作者开发并应用一种高通量、实时流式细胞术方法,利用基于荧光共振能量转移(FRET)的游离 c-di-GMP 生物传感器,在鼠伤寒沙门氏菌中筛选能调节其浓度的信号。该方法鉴定出...

Live Cell Imaging Using Riboswitch-Spinach tRNA Fusions as Metabolite-Sensing Fluorescent Biosensors.

Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) 2015 Kellenberger CA, Hallberg ZF, Hammond MC

开发荧光生物传感器的主要动机是实时监测细胞内代谢物水平。大多数可遗传编码的荧光传感器基于受体蛋白与荧光蛋白结构域的融合,但许多小分子代谢物缺乏已知蛋白受体,且基于蛋白受体的FRET传感器工程化困难。近年来,小分子结合核糖开关通过与体外筛选的Spinach适配体融合,被改造为荧光生物传感器;Spinach可结合前荧光、细胞可渗透的GF...