Rapid construction of metabolite biosensors using domain-insertion profiling.
单荧光蛋白生物传感器（SFPBs）可在活细胞内以单细胞时空分辨率定量代谢物，但将绿色荧光蛋白（GFP）理性插入配体结合域并形成有效变构耦合仍是构建瓶颈。本文提出一种无偏高通量方法——基于 DNA 测序的域插入分析（DIP-seq），通过转座子介导的随机域插入快速构建大量潜在 SFPB 文库，并结合流式细胞分选（FACS）与下一代测序...
FRET sensor-based quantification of intracellular trehalose in mammalian cells.
海藻糖是哺乳动物细胞中的应激保护剂和自噬诱导剂，但其胞内有效浓度处于微摩尔至毫摩尔范围，传统 HPLC 等碳水化合物检测方法最低可测浓度不低于 1 mM，且细胞提取过程可能造成降解，难以实现微尺度、非破坏性定量。本文报道一种基于 Förster 共振能量转移（FRET）的遗传编码海藻糖监测技术。作者将 CFP 与 mVenus 分别...