合成细胞因模块化设计和模拟生物过程的能力，在生物医学与环境应用中具有潜力。实现刺激响应性分泌对靶向递送和生物传感器开发至关重要，但以往合成细胞分泌多依赖膜孔非特异性释放，时空精度和选择性有限。本文设计并构建了一种名为TRAP（TEV蛋白酶介导的可释放肌动蛋白结合蛋白）的蛋白质平台，用于合成细胞中快速、可触发且选择性的货物分泌。TRA...
去泛素化酶（DUBs）通过移除靶向蛋白上的多聚泛素链调控蛋白降解，现有DUB活性定量方法多限于酶或细胞裂解液体系，无法在完整细胞中直接测量。本研究开发了一种可穿膜、抗蛋白酶、荧光型且DUB特异性的肽基生物传感器。该传感器N端为β-发夹序列，兼具保护肽（protectide）和细胞穿透肽（CPP）功能，可增强胞内稳定性并促进完整细胞摄...
细胞穿透肽（CPPs）作为将报告分子和药物递送至完整细胞的方法受到广泛关注。尽管已有大量研究鉴定新的CPP序列，但其在单细胞水平的摄取效率仍知之甚少。本研究利用液滴微流控捕获阵列对单细胞完整细胞群体中的CPP摄取进行表征。该微流控器件可在787个顶部捕获微孔阵列中便捷、快速地分离并分析单细胞荧光，液滴捕获效率>99%。在HeLa细胞...
为在活细胞中实时监测蛋白质的亚细胞定位、激活和相互作用，基于 FRET 的荧光蛋白生物传感器可实现高空间分辨率成像，但非特异荧光背景常掩盖微小 FRET 变化。采用 Tb(III) 或 Eu(III) 镧系配合物作为供体、GFP 等作为受体可克服该问题。其关键是 Tb(III) 配合物毫秒级长寿命发光与时间门控显微镜：脉冲激发后短暂...
许多癌症存在蛋白激酶活性失调，但并非都对抑制剂敏感，部分原因在于复杂组织中磷酸化动态尚不清楚。活细胞亚细胞分析可揭示混合细胞群体中激酶信号细节。现有原位激酶活性成像工具多依赖荧光强度或 Förster 共振能量转移（FRET），易受光谱串扰和光漂白影响。本文报道一种基于荧光寿命成像显微镜（FLIM）的细胞穿透肽生物传感器，用于动态监...
细胞周期依赖性激酶（CDK）在协调细胞生长与分裂及维持癌细胞增殖中起核心作用，是重要药物靶点。然而，目前缺乏直接评估活细胞中 CDK 相对丰度的方法，现有手段主要依赖固定细胞的抗原检测和蛋白质组分析。为直接探测这些激酶，作者开发了一种荧光肽生物传感器 CDKSENS。该传感器在体外对 CDK 和周期蛋白具有双配体亲和力，可保留细胞裂...