A general strategy to red-shift green fluorescent protein-based biosensors.
与绿色荧光蛋白（GFP）生物传感器相比，红色荧光蛋白（RFP）生物传感器因光毒性更低、自发荧光更少、组织穿透更深而具有内在优势。然而，现有RFP生物传感器常存在动态范围小、亚细胞定位错误和非期望光转换等缺陷，且可用选择有限，逐一开发耗时费力。本文提出一种通用且便捷的方法：通过遗传密码扩展，将非天然氨基酸3-氨基酪氨酸（aY）引入GF...
PIE-FLIM Measurements of Two Different FRET-Based Biosensor Activities in the Same Living Cells.
本文报道利用脉冲交错激发荧光寿命成像显微镜（PIE-FLIM）在单个活细胞中同时测量两种不同基因编码生物传感器探针的活性。许多基因编码生物传感器依赖 Förster 共振能量转移（FRET）来检测目标细胞信号事件引起的构象变化，而通过荧光寿命成像（FLIM）测量供体荧光团寿命变化是量化 FRET 的稳健方法。由于复杂信号网络研究要求...
Non-invasive cell type selective in vivo monitoring of insulin resistance dynamics.
胰岛素抵抗是心血管疾病和2型糖尿病发生发展的重要因素，但如何在活体中动态监测胰岛素靶组织中特定细胞类型的胰岛素抵抗仍缺乏有效方法。本文报道一种非侵入、纵向、细胞类型特异性的活体监测技术，以朗格汉斯岛中的胰腺β细胞为例。作者将表达FoxO1-GFP生物传感器的胰腺胰岛移植至小鼠眼前房，利用角膜作为天然光学窗口，通过荧光显微镜在单细胞分...
Fluorescent biosensors illuminate calcium levels within defined beta-cell endosome subpopulations.
活细胞成像显示钙离子（Ca2+）可在多种细胞器内进出，但酸性细胞器如内体的 Ca2+ 测量长期受技术限制。本研究将耐酸、比率型 Ca2+ 荧光生物传感器 GEM-GECO1 与比率型 pH 生物传感器 mKeima 结合，并借助 TiVAMP 将两者靶向 TiVAMP 阳性内体腔，用于测量胰腺 β 细胞中 Rab5a 和 Rab7 ...
Role of phosphodiesterases in the shaping of sub-plasma-membrane cAMP oscillations and pulsatile insulin secretion.
环磷酸腺苷（cAMP）信号的特异性和多功能性依赖空间定位与时间动态。磷酸二酯酶（PDE）通过水解 cAMP 塑造信号。胰腺β细胞中，葡萄糖触发亚质膜 cAMP 振荡，对胰岛素分泌重要，但机制不清。本研究利用表达荧光转位生物传感器的 MIN6 细胞或小鼠胰腺β细胞，以比率式消逝波显微镜监测亚质膜 [cAMP]pm，分析不同 PDE 的...
A new mitochondrial pH biosensor for quantitative assessment of pancreatic β-cell function.
线粒体pH是线粒体能量代谢的关键决定因素。本研究开发了一种基于氯离子不敏感且氢离子敏感探针的新型荧光比率型pH生物传感器，用于活细胞中直接、定量且无光漂白地测量线粒体pH。该探针由氢离子敏感的Venus H148V突变体与氢离子不敏感的GFPuv融合而成，并融合线粒体定位信号形成MTpHGV。将MTpHGV稳定转染至大鼠INS-1和...