小GTP酶RhoA参与正常组织中的多种基本过程，其时空调控被认为控制细胞的力学感知、生长和运动，而失调与疾病发生相关。本文报道了一种RhoA-荧光共振能量转移（FRET）生物传感器小鼠的构建及其在多种原生组织中实时监测RhoA活性的应用。作者利用该小鼠评估了骨内骨细胞力学感知和中性粒细胞迁移过程中RhoA活性的变化，并展示了小肠隐窝...
基于 Förster 共振能量转移（FRET）的张力传感器模块（TSMs）可用于研究细胞内不同蛋白如何承受机械力，但单皮牛顿（pN）级力仍难以分辨，且缺乏多路复用张力传感工具。本文报道了一种遗传编码的 FRET 生物传感器 FL-TSM 的构建与校准。该传感器具有近数字力响应，并在 3–5 pN 区间灵敏度提高。作者还提出一种方法，...
磷酸化是参与细胞信号转导与调控的重要翻译后修饰，但现有研究蛋白激酶磷酸化的方法往往缺乏时空分辨率，且难以在活细胞中同时实时观察多种激酶的活性。本文提出一种肽生物传感器策略，并结合时间相关单光子计数-荧光寿命成像（TCSPC-FLIM），在活体二维和三维细胞培养模型中以单细胞分辨率实时探测 VEGFR-2 和 AKT 的磷酸化活性。作...
体内显微镜（IVM）是一种可在活体动物组织中实时检测亚细胞信号或代谢事件的成像工具。然而，在高散射生物组织中成像时，激发光与发射光随深度增加而衰减，深度依赖性信号衰减是 IVM 的主要限制，使定量测量变得困难。因此，IVM 定量分析需要采用内部校准探针，或采用不同于强度测量的信号评估方式。本文描述了如何利用基因编码生物传感器探针的比...
不可切除胰腺癌患者的新兴标准治疗是吉西他滨与白蛋白紫杉醇（Abraxane）联合化疗，但患者反应仍有限。胰腺癌发生与转移发生在复杂微环境中，微环境线索与疾病进展和药物反应之间存在双向反馈。化疗前序贯双重靶向肿瘤组织张力与血管如何影响肿瘤反应尚不清楚。作者利用活体成像评估使用药物Rho激酶抑制剂法舒地尔（Fasudil）对肿瘤组织进行...
本文介绍一种开源高内容分析（HCA）仪器，利用自动荧光寿命成像（FLIM）对多孔板中固定或活细胞进行Förster共振能量转移（FRET）读出，以检测蛋白相互作用、寡聚化、异二聚化及细胞信号过程。该系统基于宽场时间门控成像，采用门控光学图像增强器（GOI）、延迟发生器和冷却CCD相机，结合Nipkow旋转盘实现光学切片，可在每个视野...
尽管 EGFR 靶向抗癌药物已广泛进入临床，但总体生存获益有限，肿瘤内异质性被认为是治疗失败的重要机制。本研究应用荧光寿命显微镜（FLIM）生物传感技术，在活体肿瘤中检测 EGFR 活性异质性。作者使用遗传编码的 CrkII 基 FRET 生物传感器 Picchu-X，其 Y221 位点被 EGFR 磷酸化后发生构象变化，改变 eG...
Src 家族酪氨酸激酶 p56Lck（Lck）的活性受 Tyr394 和 Tyr505 磷酸化调控。Tyr394 磷酸化和 Lck 构象开放被认为激活激酶，而 Tyr505 磷酸化形成关闭、失活构象。作者利用高灵敏度 FRET 生物传感器 TqLck-V2 和荧光寿命成像显微镜（FLIM），在未经刺激和 T 细胞受体（TCR）刺激后...
Ralstonia eutropha 是一种可氧化氢的细菌，能在异养与自养代谢之间切换，因而适用于生物氢生产、可降解聚合物和烃类等生物技术。其 H2 氧化在 O2 存在下由四种氢化酶介导，其中可溶氢化酶（SH）可逆地耦合 H2 氧化与 NAD+ 还原为 NADH，并已在体外和体内用于辅因子再生，因此 SH 与细胞 NADH/NAD+...