Live-Cell STED Imaging with the HyPer2 Biosensor.
受激发射损耗（STED）显微镜是一种常用的超分辨成像技术。除合成染料和荧光蛋白外，遗传编码生物传感器也可作为 STED 荧光团使用。将生物传感器与目标蛋白融合，可在活细胞内实现亚衍射极限的大分子结构成像，同时获取细胞活动相关的功能信息。本文介绍了一种用于 HyPer2 生物传感器活细胞 STED 成像的实验方案。HyPer2 是一种...
Construction of a Fluorescent H₂O₂ Biosensor with Chitosan 6-OH Immobilized β-Cyclodextrin Derivatives.
本文构建了一种基于壳聚糖6-OH固定β-环糊精衍生物的荧光H2O2生物传感器。首先将荧光探针罗丹明B（RhmB）包埋于β-环糊精（β-CD）疏水腔中，形成CTS-6-CD-RhmB包合物；随后通过戊二醛交联将过氧化氢酶（CAT）固定于壳聚糖（CTS）骨架的2-NH2位点，得到CTS-6-CD-RhmB-CAT功能膜。采用傅里叶变换红...
Local Generation and Imaging of Hydrogen Peroxide in Living Cells.
本文介绍一种用于活细胞内局部产生并检测过氧化氢（H2O2）的遗传编码系统。该系统由酵母D-氨基酸氧化酶（DAAO）和两种光谱可区分的荧光生物传感器 HyPer2 与 HyPerRed 组成；二者分别基于循环置换黄色荧光蛋白和循环置换红色荧光蛋白，可实现细胞内 H2O2 动态的时空产生与检测。协议以简单细胞培养模型为例，给出转染、成像...
Novel Fluorescence-Based Biosensors Incorporating Unnatural Amino Acids.
不同颜色的荧光蛋白是研究蛋白质结构与功能、细胞事件和状态的重要探针。通过理性设计和定向进化，研究者不断赋予荧光蛋白新性质。除用于蛋白表达水平和亚细胞定位成像外，荧光蛋白还被越来越多地工程化为生物传感器，用于在活细胞中追踪小分子代谢物浓度、酶活性和蛋白构象变化。与小分子荧光传感器不同，荧光蛋白可遗传编码，因此可在活细胞内表达，并借助细...
Real-Time H
氧化应激源于细胞内活性氧（ROS）升高，是衰老和寿命的主要决定因素，也与绝经后骨质疏松等年龄相关疾病有关。间充质干细胞（MSCs）是成骨细胞和脂肪细胞的共同前体，其分化命运受 ROS 平衡调控。MSCs 对 ROS 的耐受性高于分化细胞，其氧化还原状态依赖复杂而丰富的抗氧化机制。本研究实时分析单个成人骨髓 MSCs 中的 H2O2 ...