呼吸道合胞病毒（RSV）是儿童急性下呼吸道感染的主要病原，亟需快速、可及的分子检测手段。本研究开发了两种基于重组酶聚合酶扩增（RPA）的检测方法，用于RSV-A和RSV-B的检测与区分，分别结合荧光读出或侧流生物传感器（LFB）可视化，命名为RSV-RPA-FLU和RSV-RPA-LFB。整个流程可在40 min内完成，包括样品制备...
鸭瘟病毒（DPV）是畜禽环境中高传染性的α-疱疹病毒，可造成鸭群严重发病和经济损失，亟需特异性诊断工具。本研究开发了一种用于检测DPV强毒株的新型荧光生物传感器（R-C-CHA），将重组酶聚合酶扩增（RPA）、CRISPR/Cas12a系统和催化发夹组装（CHA）信号增强策略相结合。RPA引物针对DPV-CHv保守UL2基因区域设计...
CRISPR/Cas系统在新型生物传感核酸检测中具有重要潜力。目前化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes, S. pyogenes）临床诊断主要依赖血清学鉴定、培养和PCR，耗时长且需要复杂设备。本研究建立一种快速、简便、高灵敏的S. pyogenes检测与筛查方法，可作为现有临床检测的补充。样品处理10 min...
产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是引起食物中毒和动物肠炎的厌氧病原菌。传统培养鉴定耗时长、操作繁琐，难以满足现场快速检测需求。本研究将重组酶聚合酶扩增（RPA）与侧流层析生物传感器（LFB）联用，建立一种肉眼可视的 C. perfringens 快速检测方法。针对 C. perfringens plc ...
近期新发突发人畜共患病的暴发，迫切需要开发快速、准确、便携的病原感染筛查方法。重组酶聚合酶扩增（RPA）具有高灵敏度和高特异性，可在恒定低温下短时间完成，尤其适合现场筛查，是预防和控制人畜共患病传播的有力工具。本综述总结了RPA生物传感器的设计原理，以及荧光检测、侧流层析、酶催化反应、光谱技术、电化学技术、化学发光、纳米孔测序、微流...
CRISPR 基技术已被用于病原体的快速高灵敏检测。为检验 CRISPR 基检测策略在铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）感染诊断中的可行性，本研究建立了重组酶聚合酶扩增（RPA）后接 Cas12a 介导检测的联合方法，可通过荧光读取仪或侧流生物传感器读出，命名为 Cas12a-RCFL。Cas12a-RCF...
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的快速、准确、简便检测对临床诊断和食品安全具有重要价值。本研究开发了一种基于适配体的比色生物传感器，利用 CRISPR/Cas12a 系统和重组酶聚合酶扩增（RPA）检测 MRSA。预先偶联在磁性纳米颗粒上的银离子（Ag+）适配体不仅作为 CRISPR/Cas12a 系统反式切割的底物，还作为 A...
新冠疫情由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起，快速传播并造成重大健康与经济损失，因此开发快速、准确、可视且高通量的SARS-CoV-2检测方法具有重要价值。本文构建了基于CRISPR/Cas13a与重组酶聚合酶扩增（RPA）的生物传感器，可在30 min内检测SARS-CoV-2的S基因和Orf1ab基因。作者...
开发了一种基于双氧化还原循环放大技术、结合二硒化钨和 MXene 修饰电极的光电化学生物传感器。信号放大技术是提高灵敏度的常用方法。本文在双氧化还原循环放大方法中，以对氨基酚作为信号分子，醌酸作为氧化还原指示剂，三(2-羧乙基)膦作为优良还原剂，可显著提高光电响应。二硒化钨和 MXene 用作光敏材料。存在模型靶标呼吸道合胞病毒 R...
本研究将逆转录重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）分别与荧光检测平台和侧流生物传感器（LFB）结合，用于快速检测猪脑心肌炎病毒（EMCV）。针对EMCV 3D基因高保守区设计引物和探针，qRT-RPA与LFB RT-RPA最佳反应条件均为42 ℃、20 min。两种方法对EMCV具有高度特异性，与7种其他猪源病毒无交叉反应。以10倍系列...
本文初步验证氧化石墨烯（GO）纳米片可增强重组酶聚合酶扩增（RPA）。GO 通过吸附 RPA 反应组分诱导局部聚集，提高扩增效率；重组酶先与引物结合形成核蛋白丝并被 GO 吸附，改变其结构。基于 GO 增强 RPA 构建了等温荧光“开启”生物传感器，用于检测 RNA 干扰（RNAi）转基因植物。FAM 标记引物被 GO 吸附并通过荧...
核酸检测在生物医学研究和临床诊疗中至关重要。聚合酶链式反应（PCR）虽稳定定量，但温度循环耗时且系统开发困难。重组酶聚合酶扩增（RPA）为等温快速核酸检测方法，但现有扩增产物检测手段复杂、昂贵且易产生假阳性。本文提出一种超光谱干涉扩增产物-复合物定量方法，并结合不对称偶极复合物策略进行光学散射分析。利用 GelRed 染料与双链 D...
霍乱弧菌和创伤弧菌是与海产品相关的两种最常见食源性弧菌病原体。随着全球海洋变暖和海产品消费量增加，由这两种细菌引起的食源性疾病不断上升，带来食品安全问题和经济损失。针对种特异性基因的分子检测方法是防控细菌感染、保障食品安全的有效工具。本研究建立了一种基于等温重组酶聚合酶扩增（RPA）和三段侧流层析试纸条（LFS）的双联检测生物传感器...
DNA甲基化检测对癌症诊断和治疗具有重要意义。本文首次提出基于双甲基化敏感限制性内切酶与重组酶聚合酶扩增（RPA）辅助CRISPR/Cas13a系统（DESCS）的消化策略，用于准确灵敏测定位点特异性DNA甲基化。双内切酶体系选择性消化未甲基化靶标，对甲基化DNA无响应；完整甲基化靶标触发RPA快速放大，被消化的未甲基化靶标不能启动...
小孢子虫（Cryptosporidium parvum）是一种具有重要人畜共患意义的肠道原虫，可在全球人类及家畜、野生动物中引起隐孢子虫病。IId 亚型家族（SF）是 C. parvum 中最常见的亚型之一。部分 CRISPR/Cas 系统已用于核酸检测，具有灵活性、灵敏性和特异性。本研究将重组酶聚合酶扩增（RPA）与 Cas12a...
本文报道了一种结合重组酶聚合酶扩增（RPA）的电化学生物传感器，用于快速、灵敏检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。该传感器基于多微电极阵列芯片，包含参比电极、对电极和5个独立工作电极，可通过差分脉冲伏安法（DPV）同时检测多个靶基因。RPA反应中，RPA扩增子与工作电极上固定的巯基修饰引物杂交，随着扩增子积累，...
本研究开发了一种结合单条通用引物重组酶聚合酶扩增（SUP-RPA）与侧流层析技术的等温纸基生物传感器，用于转基因玉米（GMM）多重检测。预扩增阶段，事件特异性引物在5'端含有通用序列，并引入生物素标记的脱氧胞苷三磷酸（dCTP）脱氧核苷作为额外扩增材料，提高扩增能力并保证多重扩增效率一致。信号识别阶段，SUP-RPA产物通过侧流生物...
随着转基因作物大规模种植，亟需快速便捷的现场监测方法。本研究提出一种基于双重组酶聚合酶扩增（DRPA）的快速简便检测系统，用于现场检测转基因作物。该系统整合快速DNA提取、DRPA和侧流生物传感器（LFB），实现DNA快速提取、扩增与结果快速可视化。所建立的快速DNA提取法可在5 min内从多种作物中分离出适用于RPA和PCR的高质...
沙门氏菌是广泛分布且危害严重的食源性致病菌，现场快速确认其存在具有重要意义。本研究构建了一种无标记、级联放大可视化生物传感器，用于敏感、快速检测鼠伤寒沙门氏菌。该传感器基于RDTG原理，即重组酶聚合酶扩增（RPA）、双链特异性核酸酶（DSN）切割、末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）延伸和G-四链体输出。首先提取沙门氏菌DNA，通过RPA...
细菌的快速、灵敏、即时检测对食品安全至关重要。为满足该需求，我们开发了一种新型基于表面增强拉曼散射（SERS）的侧流层析（LF）试纸条生物传感器，并结合重组酶聚合酶扩增（RPA），用于同时检测单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）和肠炎沙门氏菌（Salmonella enterica serotype...