荧光共振能量转移（FRET）生物传感器是细胞生物学和G蛋白信号研究的重要工具。荧光寿命成像显微镜（FLIM）可避免荧光强度法的许多缺点，并能定量测量生物传感器的激活状态或FRET状态。然而，目前仍缺乏可靠的FLIM-FRET生物传感器，且已有数据处理与分析流程存在可重复性挑战。本研究在原代小鼠胰腺导管腺癌（PDAC）活细胞中建立了一...
尽管多种巨自噬机制已被解析，活细胞实时追踪仍困难。ATG4B 蛋白酶对 MAP1LC3B/LC3B 进行 C 端切割（priming），是自噬激活早期事件。由于缺乏活细胞报告子，作者开发了响应 LC3B 被 ATG4B priming 的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器。该传感器由 pH 耐受的供体-受体对 Aq...
胆碱酯酶抑制剂抗性蛋白（Ric）-8A 是 Gαi、Gαq 和 Gα12/13 的鸟苷酸交换因子，参与细胞信号转导，并作为分子伴侣介导新生 Gα 亚基与细胞膜的初始结合。Ric-8A、Gαi 亚基及其调控蛋白在胞质分裂末期前定位于中体，并与细胞分裂最后阶段相关。本研究鉴定了 Ric-8A 通过调控 Vps34 活性影响胞质分裂与断离...
本文提出一种基于波动分析的 FRET 生物传感器检测方法，用于在活细胞中同时测量蛋白质的分子流与信号活性。作者将荧光寿命成像显微镜（FLIM）的相量（phasor）分析与沿毫秒级线扫描获取的交叉对关联函数（cross-pCF）分析相结合，检测 Rho GTPase 活性（即 FRET 生物传感器信号）的空间定位，并解析该活性群体所采...
组织转谷氨酰胺酶2（TG2）是广泛表达的转谷氨酰胺酶家族成员，可介导多种蛋白底物之间的转酰胺化反应，并作为具有GTP酶活性的G蛋白发挥作用。在GDP/GTP结合及细胞内钙水平升高时，TG2可发生显著构象变化，并相互调节其酶活性。本研究构建了一种TG2生物传感器，利用Förster共振能量转移（FRET）结合荧光寿命成像显微镜（FLI...