自噬在阿尔茨海默病（AD）中受损，尤其表现为自噬体-溶酶体融合阶段。近期研究提示肌醇多磷酸 5-磷酸酶 OCRL（Lowe 眼脑肾综合征蛋白）参与该融合过程，但其在 AD 病理生理中的作用仍不清楚。本研究检测了 OCRL 在死后 AD 脑和 5XFAD 转基因小鼠模型中的定位与表达。结果显示，OCRL RNA 水平未显著改变，但 O...
自噬是癌症进展和耐药中的关键过程，但现有自噬检测方法常具侵入性且耗时，限制其在临床前药物研究中的应用。本研究开发了一种非侵入性自噬检测系统（NIADS-autophagy，又称G-cleave LC3B生物传感器），将split-luciferase生物传感器与LC3B切割序列整合，通过蛋白酶介导的降解途径快速识别Earle’s B...
本文提出一种用于全面定量自噬起始的实验方案，基于 LC3B Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器的读出。该传感器在 proLC3B 的 N 端和 C 端分别融合供体荧光蛋白 Aquamarine 和受体荧光蛋白 tdLanYFP；当 ATG4B 无活性时，proLC3B 保持完整，供体与受体距离较近而发生 FRET；A...
本研究旨在阐明介导胰岛素敏感性的新机制，以验证相应治疗靶点。作者首先建立骨骼肌细胞铁过载模型，发现铁处理后出现内质网应激和胰岛素抵抗。通过构建表达 Akt 生物传感器的细胞（基于核内 FoxO 定位）以及胰岛素信号蛋白 Western blot，评估胰岛素敏感性。使用 salubrinal 提高 eIF2α 磷酸化并促进未折叠蛋白反...
DRAM1 是感染诱导的自噬调节因子，此前显示可促进针对胞内病原体海分枝杆菌的自噬与溶酶体防御反应，但其在其他抗菌自噬机制中的作用尚不清楚。LC3 相关吞噬（LAP）是一种直接在吞噬体靶向细菌的自噬相关机制。作者此前已证明，LAP 是巨噬细胞在全身感染斑马鱼宿主中限制鼠伤寒沙门氏菌生长的主要自噬机制，因此本研究利用该感染模型探讨 D...
尽管多种巨自噬机制已被解析，活细胞实时追踪仍困难。ATG4B 蛋白酶对 MAP1LC3B/LC3B 进行 C 端切割（priming），是自噬激活早期事件。由于缺乏活细胞报告子，作者开发了响应 LC3B 被 ATG4B priming 的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器。该传感器由 pH 耐受的供体-受体对 Aq...
溶酶体是负责降解多种大分子的细胞器，其腔内高度酸性环境对溶酶体酶发挥最佳功能至关重要；溶酶体腔内酸性丧失会破坏细胞蛋白稳态，并与神经退行性变等年龄相关疾病相关。本研究利用一种新型稳健的溶酶体 pH 生物传感器 FIRE-pHLy，建立了基于细胞的荧光检测，用于高通量筛选，并将其应用于分化的 SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞。研究目标...
单分子GTP酶RalB由RalGEF激活，调控自噬与侵袭，但其多功能性机制不清。作者发现RalGEF RGL2除促进侵袭外，也是自噬所必需。他们开发自动图像分析方法Endomapper，用一个通道分割内膜区室、另一通道测量目标蛋白强度，并生成随机伪区室校正偶然共定位，以定量内源RGL2与RalB在早期内体、循环内体、自噬体和反式高尔...
针对沙门氏菌等胞内病原体的天然免疫防御高度依赖宿主自噬机制。该反应在肠道感染中沙门氏菌靶向的上皮细胞中研究较多，但巨噬细胞作为系统性感染中该病原体的主要载体，其自噬作用仍不清楚。本研究利用斑马鱼胚胎模型，在体内研究鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium）与巨噬细胞自噬机制的相互作用。结果显示，吞噬活菌而非热灭活菌可触发自噬标志...
本研究报道一种基于半导体场效应晶体管（FET）生物传感器界面 pH 传感原理，在营养饥饿条件下原位、实时、无标记监测细胞自噬的新方法。FET 栅极绝缘层表面羟基对氢离子敏感，细胞呼吸产生的 CO2 溶解于细胞/栅极界面形成氢离子，引起界面 pH 变化，并通过场效应转换为表面电位信号。将 HeLa 细胞培养于 FET 栅极表面，在去除...
本文提出基于硅纳米线（SiNW）的阻抗生物传感器（SiNW-ECIS），用于实时监测正常细胞与癌细胞在不同 pH 微环境中的行为，以辅助识别侵袭性癌细胞。酸性微环境是肿瘤侵袭和局部转移的重要特征；在酸中毒条件下，侵袭性癌细胞可通过激活自噬抑制凋亡并维持增殖。作者将 MCF10A、MCF7 和 MDA-MB468 三种乳腺细胞接种于 ...
线粒体是真核细胞主要的能量产生中心，并参与脂质代谢、钙缓冲和凋亡等关键过程，其功能障碍会破坏细胞稳态。线粒体自噬通过选择性隔离受损或功能异常的线粒体，将其转运至溶酶体降解，从而维持细胞功能并影响寿命。本文以秀丽隐杆线虫为模型，介绍在活体中定量监测线粒体自噬事件的实验方法。作者利用体壁肌细胞中表达的荧光报告系统，通过共聚焦或荧光显微镜...
生物发光共振能量转移（BRET）是一种用于分析蛋白质-蛋白质相互作用（PPIs）的技术。其独特之处在于共振能量由荧光素酶供体产生：海肾荧光素酶（Renilla luciferase）催化底物海肾素（coelenterazine）发生氧化脱羧，从而激发荧光受体，避免了荧光共振能量转移（FRET）中常见的自发荧光、光漂白和光散射等问题。...
自噬是真核细胞中降解细胞器和胞质成分的重要过程，在弓形虫中可能参与调节寄生虫存活或死亡。Atg8 与 Atg3 的相互作用是 Atg8 脂化和自噬的关键调控环节，但此前缺乏其在弓形虫中发生的直接证据。本研究首先利用间接免疫荧光（IFA）发现 GFP-TgAtg8 转基因速殖子中 TgAtg8 与 TgAtg3 部分共定位。随后，将 ...