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Development of a V5-tag-directed nanobody and its implementation as an intracellular biosensor of GPCR signaling.

The Journal of biological chemistry 2023 Zeghal M, Matte K, Venes A, Patel S 等 10 人

蛋白-蛋白相互作用(PPI)是细胞信号网络的基础。由于PPI高度动态,细胞检测常能更真实地反映生物学环境,但不同PPI检测之间可能出现不一致,部分原因在于将荧光蛋白或酶等大功能模块融合到目标蛋白上,会扰动其稳定性、亚细胞定位和相互作用。表位标签体积较小,扰动较低,但通常缺乏体内可追踪性和功能。本文开发了结合V5标签的细胞内纳米抗体N...

Engineering a Model Cell for Rational Tuning of GPCR Signaling.

Cell 2019 Shaw WM, Yamauchi H, Mead J, Gowers GF 等 10 人

G蛋白偶联受体(GPCR)信号是真核细胞响应环境刺激的主要方式,但天然信号转导架构和表达水平的多样性使刺激-响应关系难以预测。作者利用酿酒酵母基因组工程,构建了一个绝缘、模块化的最小化 GPCR 信号转导系统,以研究如何借助合成生物学工具理性调节细胞对刺激的响应。通过计算建模与实验重构,作者解析了关键信号组分的最小集合贡献,提出通过...

Real-Time Measurement of Cannabinoid Receptor-Mediated cAMP Signaling.

Methods in enzymology 2017 Hunter MR, Finlay DB, Macdonald CE, Cawston EE 等 6 人

大麻素受体与其他G蛋白偶联受体(GPCR)一样,可通过多条相关信号通路传递信号。近年来,遗传编码、可转染的cAMP生物传感器使监测GPCR介导的cAMP信号显著简化。转染这些传感器的细胞系可被连续监测,从而以前所未有的细节分析受体介导的信号过程。本文描述一种可转染生物传感器方案,该传感器通过生物发光共振能量转移(BRET)报告细胞内...