Free radical biology & medicine
2014
Banach-Latapy A, He T, Dardalhon M, Vernis L 等 6 人
氧化还原系统的动力学与空间分离使氧化还原生物学研究极具挑战。基因编码生物传感器，尤其是谷胱甘肽特异性氧化还原敏感黄色荧光蛋白（rxYFP），可克服传统 GSH/GSSG 测量局限。本研究构建分别靶向细胞质、细胞核和线粒体基质的 rxYFP 表达质粒，并导入人宫颈癌 HeLa 细胞。通过氧化还原蛋白提取、氧化还原 Western 印迹...
Cell cycle (Georgetown, Tex.)
2014
Vandame P, Spriet C, Trinel D, Gelaude A 等 8 人
蛋白激酶A（PKA）调控细胞周期等多种细胞过程。本研究利用遗传编码的FRET生物传感器，基于AKAR衍生的AKAREV探针，在活HeLa细胞中以单细胞水平表征有丝分裂过程中PKA活性。结果显示，HeLa细胞进入中期后PKA活性显著升高，并维持至胞质分裂/末期结束。采用AKAREV T>A失活突变体和H89抑制剂验证了所测PKA活性的...
Molecular bioSystems
2014
Belal AS, Sell BR, Hoi H, Davidson MW 等 5 人
基于荧光蛋白（FP）的生物传感器可实时监测活细胞内酶活性，但第一代 FRET 型激酶传感器通常荧光响应较低，优化过程费时费力。本文报道利用高通量大肠杆菌菌落筛选策略优化激酶 FRET 生物传感器。作者构建 pUADE 双表达质粒，在 Ptac 启动子下表达传感器变体，在 PBAD 启动子下表达组成型激酶；通过 L-阿拉伯糖诱导激酶表...