Metabolically-targeted dCas9 expression in bacteria.
在复杂微生物组中将基因表达限制于相关细菌物种是一个未解决问题。在人类微生物组背景下，一种理想的靶标代谢活性是葡萄糖醛酸利用酶（GUS），其参与人体胃肠道中葡萄糖醛酸化化合物的毒性再激活，包括化疗药物伊立替康。我们利用细菌中 GUS 酶分布的差异来区分具有 GUS 活性的细菌，并将葡萄糖醛酸响应型 GusR 转录因子重新用作生物传感器...
Construction of a CRISPR-Biolayer Interferometry Platform for Real-Time, Sensitive, and Specific DNA Detection.
聚簇规律间隔短回文重复（CRISPR）技术因高特异性被广泛用于核酸检测。本研究利用HaloTag与其烷烃氯配体之间高度特异且不可逆的结合，将失活CRISPR/Cas9（dCas9）进行生物素修饰，构建用于核酸检测的CRISPR生物传感器。该传感器制备简便，并能较好保留DNA识别能力。进一步将生物层干涉（BLI）技术与该CRISPR生...
Model-Assisted Fine-Tuning of Central Carbon Metabolism in Yeast through dCas9-Based Regulation.
为在工业规模上生产高价值化学品，酿酒酵母的代谢工程需要广泛调控其代谢。本文鉴定了新的基因表达微调策略，以增强内源代谢通量，提高乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A水平。将基于dCas9的转录调控与响应丙二酰辅酶A的胞内生物传感器结合，用于筛选有益调控组合。候选基因由基因组尺度代谢模型预测，并设计了靶向168个基因的gRNA文库。经多轮荧光激活细...
Multiplexed DNA Identification Using Site Specific dCas9 Barcodes and Nanopore Sensing.
在双链DNA上添加dCas9条码以识别特征短序列，为快速、高特异性分析DNA样本提供了全基因组测序之外的替代方案。固态纳米孔传感器尤其适合此类单分子传感，因为能够解析DNA分子离子电流特征中的模式。本文系统展示了利用高特异性dCas9探针在DNA上构建独特条码，并通过纳米孔传感器读出。单个dCas9探针可靶向长度达48 kbp的DN...