Identification of Neferine as a DOR Agonist Activating G
苯基异喹啉生物碱（BIAs）具有神经保护等多种生物活性。δ-阿片受体（DOR）因在神经保护与再生中的潜在作用成为有前景的治疗靶点，但 BIAs 与 DOR 结合的报道较少。本研究以莲蓬来源的 BIA 莲心碱（neferine）为潜在 DOR 激动剂开展研究。分子对接显示莲心碱在 15 种 BIA 中结合评分最高。细胞膜色谱初步检测到...
Antibody-Based Biolayer Interferometry Platform for Rapid Detection of Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin.
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）是急性肾损伤（AKI）早期诊断的关键生物标志物。本研究建立了一种基于抗体的NGAL检测系统，采用生物层干涉（BLI）这一无标记光学生物传感技术，通过监测生物传感器表面生物分子结合事件产生的实时白光干涉图案实现检测。作者制备并表征了6株抗NGAL单克隆抗体，筛选出对NGAL具有高特异性的候选...
Construction of an Immunosensor Based on the Affinity DNA Functional Ligands to the Fc Segment of IgG Antibody.
过去几十年，Fc片段偶联蛋白如Protein A广泛用于抗体纯化、抗体定点固定和生物传感平台。本研究基于前期工作，设计并筛选了一种亲和DNA功能配体（A-DNAFL），实验验证其对小鼠IgG抗体的结合亲和力（KD=6.59×10^-8），结合性能与Protein A相当。系统评估不同pH和离子强度下结合效率，最优抗体固定条件为生理p...
Brevetoxin Aptamer Selection and Biolayer Interferometry Biosensor Application.
贝类毒素（PbTxs）是强效海洋神经毒素，可致神经性贝类中毒（NSP），其环多醚结构在过去20年地理分布扩大。现有检测方法存在伦理问题和技术局限，亟需替代方法用于监管监测。本研究首次同时筛选针对PbTx-1和PbTx-2的DNA适配体，并以PbTx-1适配体为识别元件构建生物层干涉（BLI）生物传感器。通过体外筛选，从随机序列库中成...
Biolayer interferometry for adeno-associated virus capsid titer measurement and applications to upstream and downstream process development.
为支持重组腺相关病毒（rAAV）生产系统的发展，需要更快、更准确的分析方法。生物层干涉（BLI）技术通过将 AAVX 配体固定到生物传感器探针上（AAVX-BLI），已用于高通量 AAV 衣壳滴度检测。本研究使用 Octet AAVX 生物传感器，在 rAAV2、rAAV5、rAAV8 和 rAAV9 四种血清型中评估该方法，并将其...
Binding behavior of receptor binding domain of the SARS-CoV-2 virus and ivermectin.
由 SARS-CoV-2 引发的新冠疫情使伊维菌素（IVM）能否用于预防和治疗该病毒成为国际争议焦点。IVM 是 FDA 批准的抗寄生虫药，并显示一定抗病毒活性。本研究旨在利用氨基丙基硅烷（APS）疏水生物传感器模拟 SARS-CoV-2 受体结合域（RBD）与人体血管紧张素转换酶 2（ACE2）受体之间的疏水相互作用，考察 RBD...
Rational Approach to Optimizing Conformation-Switching Aptamers for Biosensing Applications.
结构转换适配体（SSA）能够借助靶标诱导的构象变化实现分子的灵敏、连续检测，但从头开发 SSA 过程复杂且耗时。本文提出一种理性优化 SSA 的策略，在提高适配体结合亲和力的同时引入靶标依赖的构象转换，使其更适用于真实生物传感场景。作者利用核磁共振（NMR）和计算建模识别关键结构特征，并据此优化靶标存在下的构象转换；同时采用大规模微...
Screening, Expression and Identification of Nanobody Against Monkeypox Virus A35R.
猴痘（Mpox）病毒疫情对全球公共卫生安全构成重大风险。A35R 是细胞外被病毒（EEV）的关键组成蛋白，在病毒传播中发挥重要作用，也是疫苗开发和血清学检测的重要靶标。目前针对 A35R 的纳米抗体研究较少。本研究从天然噬菌体展示库中筛选特异性结合 Mpox A35R 的纳米抗体，为 Mpox 疫苗和诊断试剂开发提供候选抗体。研究经...
Noncovalent antibody catenation on a target surface greatly increases the antigen-binding avidity.
免疫球蛋白G（IgG）抗体广泛用于诊断和治疗。基于IgG独特的二聚体结构，作者假设：将可同源二聚的蛋白（catenator）融合到IgG C端后，在靶抗原分子丰富的表面上可诱导抗体分子间可逆链环化，从而显著提高抗原结合亲合力。热力学模拟显示，catenator 即使具有较低的同源二聚亲和力（如解离常数100 μM），也可将纳摩尔级抗...
Fragment screening using biolayer interferometry reveals ligands targeting the SHP-motif binding site of the AAA+ ATPase p97.
生物传感器技术在基于片段的药物发现中日益重要。AAA+ ATP酶p97是维持蛋白稳态的关键蛋白，也是癌症化疗潜在靶点。现有p97抑制剂主要抑制其ATP酶活性，会全局干扰p97介导的多种过程；若通过蛋白-蛋白相互作用抑制剂阻断辅因子与N结构域结合，则可选择性调控特定功能。本文建立基于生物层干涉（BLI）的片段筛选方法，以p97 N结构...
A Rapid and Sensitive Aptamer-Based Biosensor for Amnesic Shellfish Toxin Domoic Acid.
近年来有害藻华频发，失忆性贝类毒素岩藻氨酸（domoic acid, DA）主要由假菱形藻产生，其检测需求日益迫切。适配体作为新型分子识别元件，为 DA 监测提供了清晰手段。本研究采用 Capture-SELEX 成功筛选 DA 适配体，经鉴定与截断优化获得高亲和、高特异性适配体 C1-d（KD 109 nM）。通过分子对接和分子动...
Pre-equilibrium biosensors as an approach towards rapid and continuous molecular measurements.
几乎所有基于配体-受体结合的生物传感器都在平衡条件下工作。然而，在低配体浓度下，受体（如抗体或适配体）达到平衡的过程缓慢，使平衡型传感器难以同时实现快速与高灵敏测量。本文提出一种平衡前生物传感方法的理论基础，使传感器在未达到结合平衡前即可定量测量配体浓度。该方法不再仅在单一时间点测量受体结合，而是利用受体对浓度变化的动力学响应，通过...
Construction of ssDNA-Attached LR-Chimera Involving Z-DNA for ZBP1 Binding Analysis.
蛋白质与Z-DNA的结合分析困难，尤其是短未修饰DNA易转变为B-DNA。本文通过较大环状单链DNA（ssDNA）与较小ssDNA杂交，制备了带ssDNA环的LR-chimera，其包含左手Z-DNA区和右手B-DNA区。环状ssDNA由两条线性ssDNA片段杂交形成两个缺口，再经T4 DNA连接酶封缺口获得，无需splint支架且...
Interplay of Affinity and Surface Tethering in Protein Recognition.
表面固定的配体–受体复合物是生物信号转导和细胞黏附的关键组分，也在单分子检测与生物技术中日益重要。本研究利用表面固定化传感方法，实时测量多种表面固定肽配体与其自由受体之间的结合动力学。作者以WD40重复蛋白5（WDR5）为受体，考察五种14残基SET1Win肽配体通过Win结合位点与WDR5及其突变体的相互作用。在生物层干涉（BLI...
Measurements of SARS-CoV-2 antibody dissociation rate constant by chaotrope-free biolayer interferometry in serum of COVID-19 convalescent patients.
抗原-抗体结合动力学的测量对于理解SARS-CoV-2抗体的功能效率至关重要。既往基于去污剂的亲和力成熟试验依赖人工破坏结合，不能反映天然结合动力学。本研究建立了一种无去污剂、无标记的生物层干涉（BLI）检测法，用于实时监测康复期COVID-19患者血清中受体结合域（RBD）与SARS-CoV-2刺突蛋白抗体的结合动力学。采用链霉亲...
Using Bio-Layer Interferometry to Evaluate Anti-PEG Antibody-Mediated Complement Activation.
本研究旨在建立生物层干涉（BLI）系统，作为直接评价抗聚乙二醇（anti-PEG）免疫球蛋白M（IgM）介导补体激活的替代方法，用于研究加速血液清除（ABC）现象。补体激活在聚乙二醇化及非聚乙二醇化纳米药物静脉注射后的清除中起重要作用，也被认为与反复注射 PEG 化产品后 anti-PEG 抗体结合导致的 ABC 现象有关。研究采用...
Development of a Bio-Layer Interferometry-Based Protease Assay Using HIV-1 Protease as a Model.
蛋白酶在医学、制药和生命科学中具有重要作用，因此需要低成本、可靠且灵敏的实时监测方法来测定蛋白酶活性。本文报道了一种基于重组融合蛋白底物与生物层干涉（BLI）的蛋白酶活性检测新方法，并以人类免疫缺陷病毒1型蛋白酶（HIV-1 PR）作为模型酶进行建立和验证。该方法将重组蛋白底物固定于生物传感器表面，HIV-1 PR 对其特异性切割后...
Tailor-made recombinant prokaryotic lectins for characterisation of glycoproteins.
生物类似物开发成本高昂，糖分析是限制时间与成本的关键因素。本文深入表征了若干通过定向进化获得的新型重组原核凝集素（RPLs），它们分别对α-甘露糖、β-半乳糖、岩藻糖和唾液酸残基具有特异性结合活性，并针对主要生物类似物靶标进行检测。所有凝集素的结合表征均基于生物层干涉（BLI）原理，使用链霉亲和素涂层传感器固定生物素化凝集素，实时监...
Construction of a CRISPR-Biolayer Interferometry Platform for Real-Time, Sensitive, and Specific DNA Detection.
聚簇规律间隔短回文重复（CRISPR）技术因高特异性被广泛用于核酸检测。本研究利用HaloTag与其烷烃氯配体之间高度特异且不可逆的结合，将失活CRISPR/Cas9（dCas9）进行生物素修饰，构建用于核酸检测的CRISPR生物传感器。该传感器制备简便，并能较好保留DNA识别能力。进一步将生物层干涉（BLI）技术与该CRISPR生...
Biolayer interferometry provides a robust method for detecting DNA binding small molecules in microbial extracts.
DNA复制是多种癌症治疗的重要干预靶点，许多靶向DNA的小分子已发展为临床抗肿瘤药物，如多柔比星。天然产物来源含有大量DNA结合小分子，但分离和鉴定困难，传统筛选依赖耗时的生物活性指导分级分离和细胞实验。本研究探索生物层干涉（BLI）作为快速筛选天然产物来源中DNA靶向小分子的工具。作者首先利用设计的GC富集和AT富集双链DNA寡核...