蛋白酶在医学、制药和生命科学中具有重要作用，因此需要低成本、可靠且灵敏的实时监测方法来测定蛋白酶活性。本文报道了一种基于重组融合蛋白底物与生物层干涉（BLI）的蛋白酶活性检测新方法，并以人类免疫缺陷病毒1型蛋白酶（HIV-1 PR）作为模型酶进行建立和验证。该方法将重组蛋白底物固定于生物传感器表面，HIV-1 PR 对其特异性切割后...
本研究建立了一种用于无标记检测 HIV-1 蛋白酶（HIV-1 protease）的简易传感方法。将 HIV-1 蛋白酶特异性肽底物经 N 端与羧基化磁性微球偶联，再通过肽 C 端半胱氨酸的硫原子直接固定于金传感器表面。采用表面等离子共振（SPR）实时监测不同粒径（1 μm 和 30 nm）磁性微球-肽探针的固定及蛋白酶切割效率；采...
蛋白酶在病毒生命周期和成功感染建立中至关重要，简便监测其催化活性可显著促进新型抗病毒药物发现，并有助于阐明所研究病毒蛋白酶的作用与机制。作者实验室开发了一种在T细胞中监测HIV-1蛋白酶（PR）蛋白水解活性的检测体系，具有稳健读出。该检测利用原型转录因子Gal4，其由N端DNA结合域（DBD）和C端反式激活域（TAD）组成，并基于两...
本研究通过表面等离子共振（SPR）生物传感器分析，在三个pH值下测定一系列HIV-1蛋白酶（HIV-1 PR）抑制剂的相互作用动力学，以考察抑制剂结合亲和力对pH的依赖。作者以不同质子化状态的HIV-1 PR–抑制剂复合物结构为起点，采用基于分子力学的计算协议解释实验结果。SPR实验显示不同抑制剂具有多种结合亲和力的pH依赖模式，而...
耐药HIV-1毒株的出现、现有抗HIV药物严重副作用以及有效疫苗缺乏，凸显开发新型抗病毒药物及其发现方法的需求。本文在T细胞中建立了一种监测HIV-1蛋白酶（PR）蛋白水解活性的检测系统。该系统基于诱导表达HIV-1 PR与Gal4 DNA结合域及反激活域融合蛋白；融合蛋白结合Gal4响应元件，仅在存在有效PR抑制剂（PI）时激活下...