In Vivo Quantification of Intramolecular FRET Using RacFRET Biosensors.
基因编码的FRET生物传感器是可视化活体细胞与组织中蛋白活性和信号事件的重要工具。与生化方法相比，FRET生物传感器可在活体中非侵入性地实现信号过程的空间—时间检测。尽管该技术概念相对简单，但实验流程复杂，包括传感器优化、数据采集和图像处理三个步骤，每一步均存在挑战。本章重点讨论数据采集与图像处理，并以分子内RacFRET生物传感器...
FRET Microscopy for Real-Time Visualization of Second Messengers in Living Cells.
FRET（Förster 共振能量转移）显微镜是分子生物学与医学研究中用于实时监测和定量蛋白质-蛋白质相互作用及生化过程的重要工具。该技术可在完整细胞、组织乃至亚细胞区室中研究多种新型信号转导机制。典型单分子荧光生物传感器由目标分子结合域和分别位于两侧的供体与受体荧光蛋白组成；供体在单波长光激发下发射能量，可部分转移至邻近受体，使受...
Ratiometric imaging of pH probes.
本章介绍利用比值法荧光成像测量细胞内 pH（pHi）的工具与方法。作者系统讨论了两类常用 pH 敏感探针：化学荧光染料（如 BCECF 和 SNARF）和基因编码 pH 生物传感器（如 pHluorin 及 mCherry-pHluorin 融合蛋白）。这些探针可在全 mount 组织、单个细胞、细胞膜、细胞器及亚细胞区室等尺度上检...
Imaging protein activity in live embryos using fluorescence resonance energy transfer biosensors.
基于荧光共振能量转移（FRET）的分子生物传感器是研究活细胞中蛋白活性的重要工具，但因其固有的细胞复杂性和三维成像挑战，很少用于完整生物体。本文提供在早期发育中使用单链分子内 FRET 生物传感器的实验方案，给出胚胎 FRET 比值成像的通用流程，包括数据采集条件和比值图像生成算法。作者以 pRaichu RacFRET 生物传感器...