基因编码的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器可用于活细胞光学成像，但小构象变化常限制其动态范围。为此，作者开发了用于 Rac1 激活检测的 FRET 和镧基 FRET（LRET）生物传感器，具有两个增强敏感性和动态范围的关键特征。其一，α-螺旋 ER/K 连接子分隔 FRET 供体与受体，使 C 端活性 Rac1 ...
内皮细胞间连接维持限制性屏障，并受促血管生成因子、炎症介质和黏附白细胞等刺激动态调控。这些刺激引起黏附连接暂时重塑，依赖 Rho-GTPase 控制的细胞骨架重排，但鸟苷酸交换因子（GEF）如何在内皮黏附连接处时空调控 Rho-GTPase 活性仍不清楚。本文鉴定 Rho-GEF Trio 在稳定基于血管内皮（VE）-钙黏蛋白（VE...
本研究利用组成性表达 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器的 Madin-Darby 犬肾（MDCK）细胞，实时监测上皮囊泡形成过程中 Rac1 的时空活性。作者将传统 Raichu 探针中的 CFP 替换为 TFP1，降低与 GFP 序列同源导致的基因组内重组，从而建立稳定表达 Raichu-Rac1、Raichu-...
基于荧光共振能量转移（FRET）的分子生物传感器是研究活细胞中蛋白活性的重要工具，但因其固有的细胞复杂性和三维成像挑战，很少用于完整生物体。本文提供在早期发育中使用单链分子内 FRET 生物传感器的实验方案，给出胚胎 FRET 比值成像的通用流程，包括数据采集条件和比值图像生成算法。作者以 pRaichu RacFRET 生物传感器...
本文报道了一种基于荧光各向异性的时间分辨FRET显微成像方法，用于动态监测活T细胞中Rac1活性。作者利用由增强绿荧光蛋白（eGFP）和单体红荧光蛋白（mRFP1）构成的Raichu生物传感器，通过供体-受体间FRET效率变化反映Rac1构象与活性。该传感器被表达于Jurkat T细胞中，细胞表面CD3受体与包被抗CD3抗体的玻璃底...