Development of a biosensing platform based on a laccase-hydrophobin chimera.
本研究通过基因融合将来自 Pleurotus ostreatus 的漆酶 POXA1b 与可自组装、具有粘附性的 I 类疏水蛋白 Vmh2 连接,构建漆酶-疏水蛋白嵌合体,并在毕赤酵母中表达、分泌至培养上清。未经进一步纯化的粗上清可直接涂覆聚苯乙烯 96 孔板,实现简单、稳定且低化学消耗的酶固定化。与野生型重组漆酶相比,基因融合提高...
本研究通过基因融合将来自 Pleurotus ostreatus 的漆酶 POXA1b 与可自组装、具有粘附性的 I 类疏水蛋白 Vmh2 连接,构建漆酶-疏水蛋白嵌合体,并在毕赤酵母中表达、分泌至培养上清。未经进一步纯化的粗上清可直接涂覆聚苯乙烯 96 孔板,实现简单、稳定且低化学消耗的酶固定化。与野生型重组漆酶相比,基因融合提高...
本研究制备了磁性核壳纳米颗粒 Fe3O4@Au@Lac,即以 Fe3O4 为核、Au 为壳,并在其表面固定漆酶(Lac)。通过 TEM、SEM、DLS、Zeta 电位、UV-Vis 和 TGA 对纳米颗粒进行表征,证实核壳结构、金壳厚度约 0.9 nm 以及漆酶成功负载。以邻苯二酚(catechol)检测为例,利用漆酶催化邻苯二酚氧...
乳腺癌是女性最常见恶性肿瘤,也是全球女性癌症死亡的第二大原因。早期、精准检测乳腺癌细胞对诊断和治疗具有重要意义。本文报道了一种基于介孔二氧化硅纳米颗粒(MSN)负载金纳米团簇(AuNCs)的放大信号比色检测策略,用于高效检测HER2阳性(HER2+)乳腺癌细胞。MSN具有大孔道、高比表面积和良好生物相容性,可作为酶固定化载体;AuN...
本文报道了一种用于测定汞(II)的比色生物传感器和目视检测方法。该方法基于特异性胸腺嘧啶-Hg(II)-胸腺嘧啶(T-Hg2+-T)相互作用,该相互作用可诱导由外切酶III(Exo III)介导的循环酶促放大过程,并引起金纳米颗粒(AuNPs)聚集,使溶液颜色由红色变为紫色。在优化条件下,该比色检测在524 nm处表现最佳,检出限低...
本研究开发了一种基于重金属颗粒(MP)与功能化多孔琼脂糖凝胶的肉眼检测系统,用于可视化检测扩增的大肠杆菌 O157:H7 基因。为赋予颗粒 DNA 特异性,采用亲和素修饰的 MP 与生物素偶联引物结合。多孔琼脂糖基质经 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)胺反应基团功能化,使未结合扩增基因的亲和素-MP 可通过表面氨基与 NHS 形成酰亚胺...
本研究采用结构导向设计策略,构建了一种对农药具有更高敏感性的新型合成谷胱甘肽转移酶(PvGmGSTU)变体。分子建模表明,Phe117 是形成疏水结合位点(H-site)并调节酶对外源化合物亲和力的关键残基。对 Phe117 位点进行饱和突变,建立了具有不同动力学和结合特性的 PvGmGSTU 变体库。以 25 种农药筛选显示,Ph...
快速、低成本且灵敏地检测细菌病原体对人类健康与安全具有重要意义。本文提出一种基于细菌细胞与其感染病毒(噬菌体)相互作用的简单细菌种类检测策略。作者对噬菌体 M13 进行工程化改造,使其展示天然靶向目标细菌的噬菌体受体结合蛋白。通过巯基化修饰,工程化噬菌体可结合金纳米颗粒;金纳米颗粒在噬菌体上聚集并作为信号放大器,因表面等离子共振性质...
本研究开发了一种基于多孔结构纤维素微球的葡萄糖比色生物传感器,实现“信号与颜色”双重输出。首先采用低温等离子诱导接枝聚合技术,将丙烯酸单体接枝到再生纤维素微凝胶表面,引入羧基功能基团;随后通过 EDC-NHS 交联反应将葡萄糖氧化酶(GOx)和辣根过氧化物酶(HRP)共价固定于微球内部,形成多孔酶微球。检测时,GOx 催化葡萄糖氧化...
本研究开发了一种基于金纳米颗粒(AuNPs)聚集和智能手机成像 APP 的微流控比色生物传感器,用于快速检测鸡肉中的大肠杆菌 O157:H7。链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒(MNPs)负载生物素化捕获抗体(CAbs),羧基聚苯乙烯微球(PSs)负载检测抗体(DAbs)和过氧化氢酶(CAT),在第一混合通道中与目标菌反应形成 MNP-菌...
针对食品中葡萄糖检测需求,本文提出一种基于酶催化诱导生成普鲁士蓝纳米颗粒(PBNPs)的比色生物传感器,用于白葡萄酒中葡萄糖的快速、低成本检测。将葡萄糖加入葡萄糖氧化酶(GOx)、氯化铁(FeCl3)和铁氰化钾(K3Fe(CN)6)混合液中,溶液在10 min内由浅黄色变为蓝色,可用紫外-可见光谱在706 nm处检测。与单一变色机制...
肌酸(sarcosine)是甘氨酸甲基化形成的氨基酸,在血浆和尿液中浓度升高可见于肌酸血症及前列腺癌等疾病。本研究制备了不同表面修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIONs),并用壳聚糖(CS)和肌酸氧化酶(SOX)进行修饰,未修饰粒子作为对照。动态光散射测得SPIONs/Au/NPs、SPIONs/Au/CS/NPs和SPIONs/...
本文采用软模板法合成多孔Co3O4纳米片。以两亲性嵌段共聚物F127胶束作为造孔剂,先制备多孔Co(OH)2纳米片,再经空气退火得到多孔Co3O4纳米片(Co3O4-F),其保留六边形形貌和相近尺寸。Co3O4-F同时具有过氧化物酶样和过氧化氢酶样模拟活性,且两种活性可通过pH切换;温度和Co3O4-F浓度会显著影响切换pH及双酶模...
核酸分析在疾病诊断和生物学研究中具有重要意义,但现场及低资源条件下仍需要快速、简便的特异性核酸检测方法。本文提出一种目标辅助邻近蛋白水解反应:将TEV蛋白酶和β-内酰胺酶酶原分别位点特异性偶联单链DNA探针,当目标DNA或RNA存在时,两个蛋白-ssDNA偶联物通过杂交被拉近,TEV蛋白酶切割酶原中的TEV识别位点,使β-内酰胺酶酶...
端粒酶活性检测对癌症早期诊断和药物筛选至关重要。本文基于十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)稳定金纳米棒(Au NRs)被氧化态四甲基联苯胺硫酸盐(TMB2+)刻蚀,建立一种高灵敏多色视觉端粒酶检测方法。为满足肉眼判读,引入无酶催化发夹组装(CHA)信号放大策略。端粒酶将端粒酶引物(TS)延伸后,延伸产物通过toehold介导链置换触发...
丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)是聚酮类、苯丙素类等高价值化合物合成的重要中心代谢物,但其胞内水平常受必需代谢竞争限制。现有malonyl-CoA生物传感器多依赖转录因子,仅在大肠杆菌和酿酒酵母中验证,且需多步信号转导。本文报道一种适用于大肠杆菌、铜绿假单胞菌和谷氨酸棒杆菌的比色malonyl-CoA生物传感器。作者将产生红色...
比色检测因成本低、操作简便而广泛应用于日常生活,但现有比色生物传感器多依赖单一颜色变化,多重检测能力受限。本文首次提出一种 pH 分辨比色生物传感器,用于同时检测赭曲霉毒素A(OTA)、黄曲霉毒素B1(AFB1)、伏马毒素B1(FB1)和微囊藻毒素-LR(MC-LR)四种靶标。该传感器以四种变色染料作为信号指示剂,并引入 pH 作为...
本文提出一种筛选克伦特罗(CBL)特异性适配体的多技术组合策略。以固定化单链DNA(ssDNA)文库为基础,采用指数富集系统进化(SELEX)筛选适配体,并用实时定量PCR(Q-PCR)监测富集进程;富集文库经高通量测序获得候选序列。随后利用金纳米粒子(AuNPs)比色生物传感器对候选适配体进行初步活性鉴定,并通过圆二色光谱(CD)...
比色胆碱酯酶抑制剂生物传感器可用于快速、可靠且简便地检测空气、水和表面中的毒剂。本文报道对捷克 Detehit 生物传感器的改进:该传感器基于酶促生化反应,原以 Ellman 试剂作为显色指示剂;改进通过优化反应体系,采用 Guinea Green B 作为指示剂,使颜色响应更加明显。传感器由固定化 BuChE 的酶区、含 BuTC...
传统高灵敏、高选择性分析技术虽可用于生物标志物检测与定量,但在资源匮乏环境中不如即时检测(POC)设备适用。本文开发了一种新型反应型传感材料OjoGel,将离子金嵌入琼脂糖凝胶支架中,用于泪液中抗坏血酸(AA)的POC定量。人泪液中AA病理性升高可作为眼表全层损伤的生物标志物,属于医疗急症。该材料在接触内源性生物还原剂时,嵌入的离子...
本研究将动力学掺杂策略拓展至浸涂法制备二氧化硅溶胶-凝胶薄膜,用于构建高负载酶的光学/比色生物传感器。通过控制溶胶成膜后浸入酶溶液的时间窗口,延缓缩聚反应,使酶在薄膜尚未完全固化前进入多孔网络,从而显著提高负载效率。以辣根过氧化物酶(HRP)和细胞色素 C(CytC)为模型,浸涂薄膜中可及酶浓度分别达到 5.37±0.5 和 10....