Proteopathic tau seeding predicts tauopathy in vivo.
蛋白聚集体跨细胞传播或朊病毒样种子可能驱动神经退行性疾病进展。在阿尔茨海默病等tau病中，tau种子可沿神经网络经细胞间转移传播病理，但其致病作用尚未验证，且缺乏稳健的生物样本检测手段。作者构建了一种超灵敏、特异且简便的基于FRET的流式细胞术生物传感器检测法，利用稳定表达tau或α-突触核蛋白与CFP/YFP融合蛋白的细胞系，确认...
Quantifying the length and variance of the eukaryotic cell cycle phases by a stochastic model and dual nucleoside pulse labelling.
细胞群体的基本特性包括生长速率、细胞分裂所需时间及其方差。真核细胞周期按 G1、S、G2 和 M 顺序进行，受环境信号和细胞内检查点调控。由于调控复杂，各阶段长度在不同细胞类型以及遗传和形态不可区分的细胞间差异显著。本文研究如何描述和量化细胞周期各阶段长度的均值与方差。作者引入相位分辨细胞周期模型，假设各阶段完成时间服从延迟指数分布...
Cell-based biosensor to report DNA damage in micro- and nanosystems.
理解新设计的微纳材料与系统如何影响细胞生理，是相关技术走向应用的关键。微纳系统中的力学作用、纳米材料及光、热、电场等刺激可直接或经活性氧间接损伤DNA，因此需要简便、定量、非破坏性的基因毒性评估方法。本文在NIH-3T3细胞中构建了一种基于TurboRFP的DNA损伤报告细胞系：p53响应性p21启动子驱动TurboRFP表达，使细...
Engineering an Acinetobacter regulon for biosensing and high-throughput enzyme screening in E. coli via flow cytometry.
作者建立了一套基于单细胞分选的酶活性筛选系统，用于检测产生3,4-二羟基苯甲酸（34DHB）的大肠杆菌。将从Acinetobacter sp ADP1获得的自调控转录因子pcaU及其启动子区改造后导入大肠杆菌，构建pcaU调控GFP表达的基因回路。该工程化pcaU调控子在外源34DHB浓度高于5 µM时可被诱导，因而可作为检测这一尼...
A biosensor of SRC family kinase conformation by exposable tetracysteine useful for cell-based screening.
我们开发了一种在活细胞中区分不同蛋白构象的新方法——可暴露四半胱氨酸（XTC）。该方法将工程化四半胱氨酸基序引入目标蛋白，使其根据构象状态有条件地暴露于双砷染料结合。XTC用于区分Src家族激酶的开放与关闭调控构象。仅在c-Src、Lck和Lyn三个Src家族激酶保守SH2域中将四个残基替换为半胱氨酸，即可基于与双砷染料FlAsH或...
A multiplex assay based on encoded microbeads conjugated to DNA NanoBeacons to monitor base excision repair activities by flow cytometry.
本文报道了一种用于检测纯化酶及无细胞提取物中碱基切除修复（BER）活性的新型多重检测方法。该方法首先通过快速且原创的程序，用荧光染料 Alexa 488 对磁性微珠进行编码，形成可区分的荧光条形码。随后，将含有 DNA 损伤位点的 DNA NanoBeacons（NBs）固定到荧光编码微珠表面；这些探针标记有 Cyanine 5（C...
Enrichment of differentiated hNT neurons and subsequent analysis using flow-cytometry and xCELLigence sensing.
人源神经元（hNT 神经元）由 NTera2/D1 前体细胞经 4 周分化和 2 周有丝分裂抑制获得，是研究成人人源神经元的重要模型。但收获物常混有星形胶质前体，后者难以用普通光镜识别，影响蛋白质组学、转录组学等需要高纯度培养物的应用。本文报道一种简单富集方法：在胰酶消化收获后，将细胞接种于未包被塑料培养瓶，利用星形胶质前体快速贴壁...
Microbial heterogeneity affects bioprocess robustness: dynamic single-cell analysis contributes to understanding of microbial populations.
微生物群体的异质性或分离现象已受到大量研究，但其对生物过程的真实影响仍不清楚。造成这一知识缺口的主要原因，是在动态过程条件下难以监测微生物群体异质性。在生物过程背景下，导致微生物群体异质性的主要概念可归纳为两种假设：第一种涉及单个微生物细胞在过程设备停留期间所经历的历史或路径；第二种涉及微生物群体作为风险分散策略的协同响应，以应对过...