Protocol for measuring cell cycle Zn
细胞内可交换锌离子池并非静态，既会响应外界扰动，也会随细胞周期自然波动。本文提供一套基于荧光共振能量转移（FRET）生物传感器进行长时程活细胞成像的实验方案，用于监测表达胞质锌传感器 NES-ZapCV2 的 MCF10a 细胞中游离/不稳定锌（labile Zn2+）的动态变化。方案包括细胞培养与维持、Zn2+ 控制最低培养基（M...
Ratiometric Zinc Biosensor Based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer: Trace Metal Ion Determination with Tunable Response.
金属离子（如锌）在溶液中的测定是分析化学与生物化学的重要任务。本文报道了一种基于生物发光共振能量转移（BRET）的新型锌离子生物传感方法。该方法采用碳酸酐酶（CA）与深海虾 Oplophorus gracilirostris 荧光素酶（NanoLuc）的融合蛋白，将游离锌离子水平转换为蓝色与橙色波段生物发光发射强度的比值。该传感器具...
Characterization of Caco-2 cells stably expressing the protein-based zinc probe eCalwy-5 as a model system for investigating intestinal zinc transport.
肠锌重吸收，尤其是其调控机制，尚未完全阐明，亟需合适的肠细胞模型在体外研究锌摄取动力学及肠细胞内活性锌的作用。本研究构建了稳定表达基因编码锌生物传感器 eCalwy-5 的 Caco-2 细胞克隆，并评估该克隆是否保留肠上皮细胞特征。与野生型 Caco-2 相比，Caco-2-eCalwy 仅在紧密连接蛋白 occludin 的亚细...
Quantitative imaging of mitochondrial and cytosolic free zinc levels in an in vitro model of ischemia/reperfusion.
锌离子在缺血性卒中、癫痫持续状态和创伤性脑损伤后的细胞毒性作用仍有争议，但可能源于线粒体功能障碍。本文报道了一种基于人碳酸酐酶II（CA II）变体的激发比率荧光生物传感器，并将其表达于线粒体基质，用于定量成像其中的游离锌水平。在PC12大鼠嗜铬细胞瘤细胞培养系中，作者测得线粒体基质平均游离锌浓度约为0.2 pM。随后在细胞氧葡萄糖...