Journal of visualized experiments : JoVE
2018
Machen AJ, O'Neil PT, Pentelute BL, Villar MT 等 6 人
体内蛋白常以大型大分子复合物形式存在,其结合特异性与动态变化决定功能输出。本研究在生物层干涉(BLI)生物传感器表面组装并转化炭疽毒素前内体复合物。首先,将半胱氨酸突变的致死因子 N 端(LFN)通过二硫键以最佳取向偶联至 BLI 传感器,使保护性抗原前孔(PAprepore)结合,Kd 约 1 nM。取向优化的 LFN-PApre...
Membranes
2016
Silin V, Kasianowicz JJ, Michelman-Ribeiro A, Panchal RG 等 6 人
tethered lipid bilayer membranes (tBLMs) 已用于生物传感和膜蛋白结构研究。本文报道了一种用于检测炭疽毒素的生物传感器,其通过自组装 tethered lipid bilayer membrane 并嵌入 Bacillus anthracis 保护性抗原(PA63)离子通道构建;PA63 通道既...
The Journal of membrane biology
2015
Akkaladevi N, Mukherjee S, Katayama H, Janowiak B 等 9 人
细菌毒素或病毒进入细胞常需细胞表面结合与内吞,内体酸化诱导可溶性毒素有限展开/重折叠并插入膜。作者提出,通过理性固定可溶性毒素,使膜插入前的展开-重折叠转变朝向远离固定表面的方向进行,可在脂质胶束/前纳米盘存在下观察毒素膜插入复合物。以炭疽毒素保护抗原(PA)为例,将固定化的前孔形式在模型脂质膜(纳米盘)中转变、插入,并以膜溶解形式...
Biochemistry
2013
Naik S, Brock S, Akkaladevi N, Tally J 等 11 人
炭疽保护性抗原(PA)前孔七聚体的第2结构域在内体酸化过程中发生展开与再折叠,形成可插入内体膜的约100 Å β桶状孔,并促进致死因子(LF)和/或水肿因子(EF)从内体向细胞质转位。作者构建了PA前孔与LF结合域LFN的固定化复合物,利用表面等离子共振(SPR)和生物层干涉(BLI)实时监测前孔向孔转变的动力学。当溶液pH从7.5...
Analytical chemistry
2010
Mukundan H, Xie H, Price D, Kubicek-Sutherland JZ 等 9 人
单一生物标志物难以准确预测疾病,理想生物检测技术应能定量、可重复、灵敏地检测有限标志物组合。本文报道基于平面光学波导的生物传感器平台,利用半导体量子点作为荧光报告物,对炭疽杆菌致死毒素的保护性抗原(PA)和致死因子(LF)进行多重检测。该平台可扩展至多种生物标志物,实现比传统免疫分析更快的定量、灵敏、多重检测。检测在复杂生物样品(如...