Journal of visualized experiments : JoVE
2018
Machen AJ, O'Neil PT, Pentelute BL, Villar MT 等 6 人
体内蛋白常以大型大分子复合物形式存在，其结合特异性与动态变化决定功能输出。本研究在生物层干涉（BLI）生物传感器表面组装并转化炭疽毒素前内体复合物。首先，将半胱氨酸突变的致死因子 N 端（LFN）通过二硫键以最佳取向偶联至 BLI 传感器，使保护性抗原前孔（PAprepore）结合，Kd 约 1 nM。取向优化的 LFN-PApre...
The Journal of membrane biology
2015
Akkaladevi N, Mukherjee S, Katayama H, Janowiak B 等 9 人
细菌毒素或病毒进入细胞常需细胞表面结合与内吞，内体酸化诱导可溶性毒素有限展开/重折叠并插入膜。作者提出，通过理性固定可溶性毒素，使膜插入前的展开-重折叠转变朝向远离固定表面的方向进行，可在脂质胶束/前纳米盘存在下观察毒素膜插入复合物。以炭疽毒素保护抗原（PA）为例，将固定化的前孔形式在模型脂质膜（纳米盘）中转变、插入，并以膜溶解形式...
Biochemistry
2013
Naik S, Brock S, Akkaladevi N, Tally J 等 11 人
炭疽保护性抗原（PA）前孔七聚体的第2结构域在内体酸化过程中发生展开与再折叠，形成可插入内体膜的约100 Å β桶状孔，并促进致死因子（LF）和/或水肿因子（EF）从内体向细胞质转位。作者构建了PA前孔与LF结合域LFN的固定化复合物，利用表面等离子共振（SPR）和生物层干涉（BLI）实时监测前孔向孔转变的动力学。当溶液pH从7.5...