为遏制由SARS-CoV-2引起的COVID-19疫情，亟需筛选能阻断冠状病毒复制与致病性的抑制剂。冠状病毒3C样蛋白酶（3CLpro，又称主蛋白酶Mpro）编码于复制酶多聚蛋白中，是抗病毒药物开发的重要靶点，因为其蛋白酶活性对形成功能性复制复合体必不可少。目前急需可用于筛选蛋白酶抑制剂并鉴定SARS-CoV-2复制酶产物的试剂。本...
本研究利用基于大肠杆菌（E. coli）的全细胞细菌荧光素酶生物传感器，研究张力烃2,2’-双(双环[2.2.1]庚烷)（BBH）的毒性。该传感器将发光杆菌（Photorhabdus luminescens）luxCDABE荧光素酶基因与多种应激诱导启动子转录融合，当细胞受到毒性刺激时发光增强。结果表明，BBH具有基因毒性，可诱导细...
冠状病毒（CoVs）感染人和多种动物，引起高流行且严重的疾病。3C样蛋白酶（3CLpro，又称主蛋白酶）对病毒复制至关重要，并参与病毒多蛋白切割和宿主免疫调节，是抗病毒药物开发的重要靶点。本研究以猪流行性腹泻病毒（PEDV）3CLpro为模型，鉴定影响酶活性的关键新残基。首先建立一种快速、灵敏、高效的荧光素酶生物传感器，用于在哺乳动...
甲型肝炎由甲型肝炎病毒（HAV）引起，全球广泛分布。HAV 3C半胱氨酸蛋白酶（3Cpro）负责病毒多聚蛋白的大部分切割，对病毒复制至关重要。此前研究证明 HAV 3Cpro 可切割人 NF-κB 必需调节因子（NEMO），而 NEMO 参与干扰素信号。基于此，作者构建了四种含 NEMO 切割序列（PVLKAQYADIYKA）和/或...
随着自然杀伤（NK）细胞疗法用于肿瘤治疗，亟需检测细胞死亡早期事件的新工具。作者将蛋白酶可裂解荧光素酶生物传感器技术应用于人 NK 细胞识别肿瘤细胞的活细胞体系，评估穿孔素依赖性与非依赖性死亡通路。通过 Fc 受体和 NK 激活受体介导的细胞间信号，15 分钟内即可测得荧光素酶信号。除已报道的半胱天冬酶可裂解传感器外，作者开发了颗粒...
四氢生物蝶呤（BH4）是内皮型一氧化氮合酶（eNOS）合成一氧化氮（NO）所必需的辅因子，BH4 与活性位点关键色氨酸残基的相互作用对酶活性至关重要。本研究在新型四环素调控 GTP 环化水解酶 I（GTPCH）表达细胞系中过表达人 eNOS W447A 和 W447F 突变体，以评估 BH4 和 Trp-447 在 eNOS 解偶联...