Enzyme Fragment Complementation Driven by Nucleic Acid Hybridization.
本文设计并验证了一种基于核酸杂交驱动蛋白片段互补的增益型生物传感器，用于检测核酸-核酸相互作用。该体系将NanoBiT发光酶的大片段LrgBiT和小片段SmBiT的C端通过酯键连接到甾醇修饰寡脱氧核苷酸（steramer）上，并利用果蝇hedgehog自加工结构域DHhC作为自切割催化元件完成生物偶联。当存在含有相邻互补序列的单链D...
Paired dCas9 design as a nucleic acid detection platform for pathogenic strains.
分子信标探针在特定DNA检测及即时诊断病原体DNA检测试剂盒快速开发中应用广泛，但受靶序列选择灵活性不足和荧光输出不稳定限制。本文报道一种体外DNA检测系统，由一对dCas9蛋白分别连接荧光素酶分裂片段NFluc和CFluc，称为Paired dCas9（PC）报告系统。两个单链向导RNA（sgRNA）分别引导NFluc-dCas9...
A Split Methyl Halide Transferase AND Gate That Reports by Synthesizing an Indicator Gas.
在土壤、海水和废水等高度不透明或强自荧光环境中，监测微生物反应仍具挑战。为观察位于环境基质中的微生物内翻译后反应，作者设计了一种甲基卤化物转移酶（MHT）片段互补检测，通过合成指示气体进行报告。研究证明，在 Rossmann 结构域高序列变异区进行主链断裂可得到 split MHT（sMHT）AND 门，其片段协同结合并合成 CH3...
KinCon: Cell-based recording of full-length kinase conformations.
激酶改变具有不同的功能特征，需要针对激酶突变的治疗策略。除磷酸转移活性、蛋白丰度和分子间相互作用外，特定患者突变还可诱导病理性激酶构象。尽管靶向临床相关肿瘤激酶功能的先导分子研究取得重要进展，但许多激酶仍未纳入药物发现。部分原因在于追踪激酶活性存在困难。需要化学探针来功能注释激酶功能，而某些激酶活性并不依赖磷酸转移，这类非催化功能与...
Split protein biosensor assays in molecular pharmacological studies.
动态蛋白-蛋白相互作用（PPIs）是细胞信号转导和药物靶点调控的核心事件。本文综述了基于蛋白片段互补的遗传编码分裂蛋白生物传感器（split biosensor assays, SBAs；protein fragment complementation assays, PCAs）在分子药理学细胞检测中的应用。该类方法将失活的报告蛋白...
A pivotal role for tryptophan 447 in enzymatic coupling of human endothelial nitric oxide synthase (eNOS): effects on tetrahydrobiopterin-dependent catalysis and eNOS dimerization.
四氢生物蝶呤（BH4）是内皮型一氧化氮合酶（eNOS）合成一氧化氮（NO）所必需的辅因子，BH4 与活性位点关键色氨酸残基的相互作用对酶活性至关重要。本研究在新型四环素调控 GTP 环化水解酶 I（GTPCH）表达细胞系中过表达人 eNOS W447A 和 W447F 突变体，以评估 BH4 和 Trp-447 在 eNOS 解偶联...
A novel luminescent biosensor for rapid monitoring of IP3 by split-luciferase complementary assay.
肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）是调控多种生理信号过程的关键第二信使，其含量异常与多种疾病相关，因此需要快速、灵敏且可高通量监测IP3动态变化的方法。本文报道了一种基于分裂荧光素酶互补策略的新型发光生物传感器，用于直接检测IP3。该传感器将人源IP3受体2型（IP3R2）的IP3结合核心域（IBC）融合于萤火虫荧光素酶（FLuc）两...