De Novo Design of High-Performance Cortisol Luminescent Biosensors.
频繁、可靠的皮质醇检测对诊断和管理肾上腺疾病、应激反应及昼夜节律紊乱至关重要。现有皮质醇检测主要依赖酶联免疫吸附测定（ELISA）或液相色谱-串联质谱（LC-MS），需实验室完成，难以满足现场即时检测需求。蛋白生物传感器可通过分析物诱导的构象变化直接调控报告模块活性，实现混合即读，但尚无稳健的现场可用皮质醇蛋白传感器。本研究从头设计...
An immunoassay based on bioluminescent sensors for rapid detection of African swine fever virus antibodies.
血清学抗体检测对传染病诊断与控制具有重要意义。非洲猪瘟是家猪和野猪最严重的传染病，近年来严重威胁全球养猪业。本文开发了一种基于分裂荧光素酶系统的快速、简便、灵敏免疫分析方法，用于检测非洲猪瘟病毒（ASFV）特异性IgG抗体。在该方法中，ASFV的p30蛋白与纳米荧光素酶NanoLuc的LgBiT和SmBiT亚基进行基因偶联，作为融合...
Experimental and Analytical Framework for "Mix-and-Read" Assays Based on Split Luciferase.
免疫检测如酶联免疫吸附试验（ELISA）在即时检测中常受限于蛋白固定化、多步结合与洗涤。本文提出基于分裂荧光素酶的简单模块化“混合即读”酶互补实验与分析框架，用于溶液中分析物的敏感检测与定量。针对目标分析物非重叠表位的两个工程化蛋白结合子分别融合到无活性荧光素酶片段，形成生物传感器探针。通过酵母表面展示从Sso7d突变组合库分离靶向...
Split-luciferase complementary assay of NLRP3 PYD-PYD interaction indicates inflammasome formation during inflammation.
NLRP3炎性小体是固有免疫系统中响应多种刺激并激活炎症信号级联的关键大分子复合物。结构研究表明，胞质受体NLRP3受刺激后寡聚化，并作为支架形成ASC丝状结构，从而激活procaspase-1。尽管已有大量NLRP3炎性小体结构证据，但NLRP3 pyrin结构域（PYD）的相互作用及其功能意义仍不清楚。本研究采用分裂荧光素酶互补...
The Lumiptosome, an engineered luminescent form of the apoptosome can report cell death by using the same Apaf-1 dependent pathway.
凋亡特征检测对理解细胞死亡方式至关重要。本文报道一种全细胞生物传感器，利用分裂荧光素酶互补法检测 Apaf-1 结合与凋亡体形成。通过 CRISPR-Cas9 技术将萤火虫荧光素酶 N 端（Nluc）和 C 端（Cluc）片段融合至人源 Apaf-1 N 端，在 HEK293 细胞中构建，获得可发光的凋亡体形式，命名为 Lumipt...
Optimization of Experimental Variables Influencing Apoptosome Biosensor in HEK293T Cells.
凋亡蛋白酶激活因子1（Apaf-1）分裂荧光素酶生物传感器已被用作检测早期凋亡的生物工具。此前，研究者通过细胞体系中多柔比星的作用以及无细胞体系中细胞色素c和ATP的添加，验证了该报告系统检测凋亡小体形成的功能。本研究建立了一种不依赖药物、细胞色素c/ATP的凋亡诱导方式，即依靠生物传感器自身表达诱导凋亡小体形成。在无药物处理条件下...
Novel biosensor using split-luciferase for detecting vitamin D receptor ligands based on the interaction between vitamin D receptor and coactivator.
维生素D受体（VDR）配体，如1α,25-二羟基维生素D3 [1α,25(OH)2D3]及其类似物，因在I型佝偻病、骨质疏松、银屑病、白血病和癌症等疾病治疗中的潜在临床应用而受到研究。此前，我们报道了一种基于分裂荧光素酶的生物传感器，可在短时间内检测VDR配体并评估其与VDR配体结合域（LBD）的亲和力。然而，若要检测血浆中1α,2...
Novel split luciferase-based biosensors for evaluation of vitamin D receptor ligands and their application to estimate CYP27B1 activity in living cells.
本研究报道了一种基于分裂荧光素酶的新型生物发光传感器，用于在体内外评价维生素D受体（VDR）配体。此前构建的 LucN-LBD-LucC 传感器由萤火虫荧光素酶 N 端片段（LucN）、VDR 配体结合域（LBD）和 C 端片段（LucC）融合而成，VDR 配体结合后荧光素酶光强下降，虽可快速检测但灵敏度不足。为此，作者将参与 LB...
A LATS biosensor screen identifies VEGFR as a regulator of the Hippo pathway in angiogenesis.
Hippo通路是组织发育与稳态的核心调控网络，并参与血管发育。本文开发了一种基于生物发光的LATS生物传感器（LATS-BS），用于实时、非侵入性监测Hippo通路核心激酶LATS的活性。该传感器由Nluc-YAP15和14-3-3-Cluc两个分裂荧光素酶融合蛋白组成：当LATS磷酸化YAP15的S127位点后，14-3-3结合磷...
Split luciferase-based biosensors for characterizing EED binders.
胚胎外胚层发育蛋白（EED）是多梳抑制复合物2（PRC2）的亚基，通过结合H3K27me3前馈调控PRC2甲基转移酶活性。作者近期发现一类结合EED H3K27me3口袋的新型变构PRC2抑制剂（EEDi）。为鉴定和表征该抑制剂，作者开发了多种检测，其中一种是基于EED[G255D]突变体与分裂萤火虫荧光素酶构建的遗传编码EED生物...
Split-luciferase complementary assay: applications, recent developments, and future perspectives.
生物发光体系因量子产率较高、可在绿到红宽光谱范围发射光子，被视为生物分析中有力的报告系统。生物化学事件通常由大型蛋白机器完成，这些分子复合物由少数至多个蛋白通过相互作用组装而成，蛋白-蛋白相互作用对细胞生物活性至关重要。分裂荧光素酶互补实验使研究两个或多个相互作用蛋白成为可能：将荧光素酶的两个结构域分别连接至两个相互作用蛋白，当蛋白...
A novel luminescent biosensor for rapid monitoring of IP3 by split-luciferase complementary assay.
肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）是调控多种生理信号过程的关键第二信使，其含量异常与多种疾病相关，因此需要快速、灵敏且可高通量监测IP3动态变化的方法。本文报道了一种基于分裂荧光素酶互补策略的新型发光生物传感器，用于直接检测IP3。该传感器将人源IP3受体2型（IP3R2）的IP3结合核心域（IBC）融合于萤火虫荧光素酶（FLuc）两...
Design and development of a whole-cell luminescent biosensor for detection of early-stage of apoptosis.
本文报道一种基于Apaf-1寡聚化和凋亡小体形成、利用分裂荧光素酶策略检测早期凋亡的新型全细胞生物传感器。将荧光素酶N端片段（1–416 aa）和C端片段（395–550 aa）分别融合至Apaf-1 N端，构建N-Luc–Apaf-1和C-Luc–Apaf-1表达载体，共转染HEK293T细胞。用阿霉素诱导凋亡后，线粒体释放细胞色...