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Novel fluorescent GPCR biosensor detects retinal equilibrium binding to opsin and active G protein and arrestin signaling conformations.

The Journal of biological chemistry 2020 Schafer CT, Shumate A, Farrens DL

视紫红质是典型的A类光敏G蛋白偶联受体(GPCR),但其共价结合的视黄醛配体使药物研究受限。光照射将11-顺式视黄醛(11CR)异构化为全反式视黄醛(ATR),后者作为激动剂激活受体并偶联G蛋白。作者此前发现ATR虽以席夫碱共价结合,却可表现出平衡结合特征。本文建立基于视蛋白的荧光生物传感器,将G蛋白转导蛋白Gα C末端片段(GtF...

Rhodopsin-mediated light-off-induced protein kinase A activation in mouse rod photoreceptor cells.

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2020 Sato S, Yamashita T, Matsuda M

视网膜中光诱导的突触外多巴胺释放可降低视杆细胞内环磷酸腺苷(cAMP)水平,并介导光依赖性脱敏,但视杆细胞 cAMP 动态的精细时间过程因技术困难而难以解析。本研究利用表达 FRET 型蛋白激酶 A(PKA)活性生物传感器 AKAR3EV 的 PKAchu 小鼠,通过双光子活体成像观察离体视网膜中 PKA 的时空调控。除已知的开光诱...

On-chip photoactivation of heterologously expressed rhodopsin allows kinetic analysis of G-protein signaling by surface plasmon resonance spectroscopy.

Analytical and bioanalytical chemistry 2010 Komolov KE, Aguilà M, Toledo D, Manyosa J 等 6 人

表面等离子共振(SPR)光谱可实时研究蛋白质相互作用动力学,但将其应用于 G 蛋白偶联受体(GPCR)时,受限于受体表达量低以及天然构象对疏水跨膜脂质环境的强烈依赖。本文比较了三种将视紫红质(rhodopsin, Rho)固定于传感器芯片表面的策略,分别采用凝集素 ConA 和针对不同末端位点的抗体进行受体捕获。通过系统考察 pH ...

表面等离子共振(SPR)生物传感器 视紫红质G蛋白偶联受体光激活动力学分析

Application of surface plasmon resonance spectroscopy to study G-protein coupled receptor signalling.

Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) 2010 Komolov KE, Koch KW

G蛋白偶联受体视紫红质是七次跨膜螺旋受体的经典范例,它可被光激发并将光信号传递至G蛋白介导的级联反应。该受体触发级联中的许多组分可从天然来源以天然形式纯化,因而非常适合生物物理研究。细胞信号转导研究的核心在于定量理解蛋白质-蛋白质相互作用。表面等离子共振(SPR)光谱是一种基于生物传感器的技术,可通过测定动力学参数研究分子相互作用。...

表面等离子共振(SPR)生物传感器 视紫红质G蛋白偶联受体转导蛋白光触发结合