尽管荧光分析方法已用于细胞内分析，但对细胞内蛋白酶的精确分析灵敏度较低，难以观察与癌症和神经退行性疾病相关的细胞凋亡。本研究首次提出一种基于金属增强荧光（MEF）的高灵敏生物传感器，用于检测蛋白酶。该传感器采用双功能金纳米颗粒（AuNP），通过单链DNA（ssDNA）和肽同时连接荧光团。当蛋白酶caspase-3特异性切割肽后，ss...
凋亡在发育与疾病中发挥关键作用，但现有检测方法多为体外终点实验，难以在活体生理环境中实时监测。本研究构建了转基因传感器斑马鱼，使其皮肤特异性表达一种基于荧光共振能量转移（FRET）的 caspase-3 生物传感器。正常状态下，皮肤细胞发出绿色荧光；当凋亡过程中 caspase-3 被激活时，皮肤细胞转为发出蓝色荧光。通过时间序列 ...
细胞内检测Caspase-3活性对研究细胞凋亡及相关疾病至关重要。现有基于纳米材料的生物传感器常因缺乏简便高效的生物功能化方法而稳定性差或制备复杂，限制了其在复杂生理环境中的应用。本文以聚多巴胺（PDA）作为纳米-生物界面，发展了一种二硫化钼纳米片（MoS2 NSs）的共价生物功能化策略，并构建了细胞内荧光生物传感器MoS2@PDA...
时间分辨荧光技术可通过在脉冲激发光与信号采集之间设置延迟时间，降低细胞和组织中短寿命背景发光及自发荧光的干扰。本文制备了持久发光纳米颗粒（PLNPs），并以此构建通用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）平台，用于生物传感、细胞凋亡荧光寿命成像以及细胞内半胱天冬酶-3（caspase-3）的原位寿命定量。作者将染料标记的肽或 D...
二维培养常用于药物测试，但难以反映肿瘤内部细胞的空间相互作用；三维培养可模拟实体瘤结构，却难以长期评估药物效应，因此需要实时、纵向分析平台。本研究将编码荧光共振能量转移（FRET）生物传感器的质粒 DNA 转染人乳腺癌细胞，建立 MCF7-C3 和 MDA-MB-231-C3 细胞系，用于检测 caspase-3 激活。健康细胞呈绿...
双光子激发（TPE）以近红外光为激发源，相比单光子激发在生物医学成像中具有更低组织自荧光、更低光损伤、更高空间分辨率和更深穿透深度等优势。β-环糊精聚合物（βCDP）基双光子吸收（TPA）荧光纳米胶束具有理想的双光子敏化荧光性质、高光稳定性、高细胞渗透性和优异生物相容性。本文结合纳米结构双光子染料（TPdye）/βCDP纳米胶束与T...
细胞质中的 caspase-3 样蛋白酶，如 caspase-3 和 caspase-7，在介导凋亡进程中具有核心作用。为在多细胞环境中方便监测 caspase-3 样活性，作者开发了一种遗传编码的开关型荧光指示剂。该指示剂是含有 caspase-3 切割位点作为开关的环化嵌合体。当被 caspase-3 样蛋白酶切割时，非荧光指示...
背景：半胱天冬酶（caspase）激活是凋亡执行的关键步骤，但起始半胱天冬酶-8（CASP8）激活的动态过程尚未完全阐明。方法/主要发现：作者建立了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的生物传感器，用于在单细胞水平可视化与 CASP8 激活相关的凋亡信号。该双 FRET（dual-FRET）系统由三荧光蛋白融合蛋白 CYR83 组成...
荧光共振能量转移（FRET）结合荧光蛋白是检测细胞内蛋白相互作用、酶活性和小分子的重要方法。受一种新型紫激发黄色荧光蛋白的启发，作者开发了基于双FRET的caspase-3生物传感器。由于两套FRET对具有明显不同的激发光谱，每个FRET生物传感器在另一个存在时均可进行比率成像。文中报道了通过定向进化获得的紫激发黄色荧光蛋白mAme...