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Integration of FRET and sequencing to engineer kinase biosensors from mammalian cell libraries.

Nature communications 2021 Liu L, Limsakul P, Meng X, Huang Y 等 15 人

Förster 共振能量转移(FRET)生物传感器因灵敏度有限而应用受限。本文提出一种将高通量 FRET 分选与下一代测序(FRET-Seq)相结合的策略,利用自激活 FRET(saFRET)生物传感器,直接在哺乳动物细胞大规模文库中鉴定具有不同底物序列的高灵敏激酶传感器。作者以 Fyn 和 ZAP70 激酶为对象,通过融合活性激酶...

Fyn Kinase Controls Tau Aggregation In Vivo.

Cell reports 2020 Briner A, Götz J, Polanco JC

阿尔茨海默病是以β-淀粉样蛋白斑块和tau神经原纤维缠结为特征的蛋白病,而原发性tau病仅表现为tau病理。Fyn激酶在β-淀粉样蛋白介导的tau依赖性突触毒性中起关键作用,但其是否独立于β-淀粉样蛋白调控tau病理尚不清楚。作者构建了将突变tau过表达与Fyn基因敲除结合的Tg/Fyn-/-小鼠。结果显示,Tg/Fyn-/-小鼠皮...

Optogenetic Control for Investigating Subcellular Localization of Fyn Kinase Activity in Single Live Cells.

Journal of molecular biology 2020 Huang Z, Ouyang M, Lu S, Wang Y 等 5 人

既往多种 Src 家族激酶生物传感器研究显示,细胞核内激酶活性明显低于胞质,提示核与胞质存在不同调控。本研究以 Fyn 为例,构建了带光诱导核定位信号的 Fyn FRET 生物传感器,证明 Fyn 激酶活性在核内显著低于胞质。为进一步理解 Fyn 与其磷酸酶在胞质和核内不同平衡状态的维持机制,作者又构建了融合光诱导核定位信号的 Fy...