咖啡酸苯乙酯（CAPE）是蜂胶中常见的疏水性植物化学物质，具有抗氧化、抗炎和心血管保护等作用。然而，识别 CAPE 的分子实体未知，且该分子相互作用是否参与靶细胞抗氧化反应仍不清楚。本研究假设 TRP 离子通道亚家族作为识别细胞膜上 CAPE 的分子实体，并允许完整内皮细胞抗氧化能力快速变化。通过监测微血管内皮细胞模型中胞质 Ca2...
为实现无需免疫染色即可快速、便捷、特异性地检测活内皮细胞（ECs），我们开发了一种基于开启型荧光蛋白的生物传感器，命名为 LV-EcpG。该传感器包含通过噬菌体展示技术获得的高亲和肽 E12P，用于特异性识别 ECs，以及融合两个连接肽的开启型 EGFP。这种基因编码荧光蛋白生物传感器（FPB）的“开–关”切换机制确保荧光信号仅在结...
钙调蛋白（CaM）是 Ca2+ 感受蛋白，参与多种血管平滑肌细胞（VSMC）功能。由于 CaM 表达量不足以覆盖其众多靶蛋白，调控其表达及靶蛋白相互作用的因子可广泛影响血管功能。VSMC 接受内皮细胞（EC）的多种调控，但 EC 是否通过控制 VSMC 中 CaM 表达及相互作用调节血管功能尚不清楚。本研究使用同一血管分离的 EC ...
多光谱活细胞成像可利用光谱不同的生物传感器在空间和时间维度同时检测生物过程，但不同荧光生物传感器的灵敏度、动态范围等差异可能影响同一分析物在不同亚细胞区室中的准确共成像。本研究建立了一种单色多参数成像方法，利用 H2O2 生物传感器 HyPer7 同时检测细胞核、胞质和线粒体中的过氧化氢。通过共培养稳定表达不同靶向 HyPer7 的...
Rho GTPase 家族参与肌动蛋白动力学并调控内皮屏障功能，其中 Cdc42 是主要的促屏障 Rho GTPase。目前内皮细胞中 Cdc42 信号网络的调控机制仍缺乏分子细节。本研究聚焦于内皮细胞中表达的 15 种 Rho 鸟苷酸交换因子（GEF），利用单细胞 FRET 生物传感器在原代人脐静脉内皮细胞中监测其对 Cdc42 ...
过氧化氢（H2O2）调控血管内皮细胞关键磷酸化通路，并影响内皮型一氧化氮合酶（eNOS）信号。细胞内外 H2O2 均参与 eNOS 调控，但具体通路不清。本研究利用化学遗传学与活细胞成像，在 EA.hy926 人内皮细胞的胞质、核和小窝中生成并检测 H2O2。作者构建了靶向酵母 D-氨基酸氧化酶（DAAO）与新型 H2O2 生物传感...
血管内皮细胞（ECs）可感知血流产生的剪切应力并将其转化为细胞内生化信号，其中钙离子信号在机械转导中起关键作用。已知剪切应力可促使内皮细胞在小窝（caveolae）处释放三磷酸腺苷（ATP），释放的 ATP 激活 P2 嘌呤能受体，引起细胞外钙离子内流；但剪切应力如何诱发 ATP 释放仍不清楚。本研究证明线粒体在该过程中发挥关键作用...
血流产生的流体剪切应力（FSS）通过内皮细胞连接机械传感复合体调控血管发育、血压和动脉粥样硬化。既往研究提示 PECAM-1 在流动中受力并启动信号，但机制不清。本研究基于已建立的 FRET 张力生物传感器，开发并验证了 VE-cadherin 和 PECAM-1 的 FRET 张力探针。静态培养中，细胞连接处 VE-cadheri...
过氧化氢等活性氧深度参与内皮细胞信号转导。AMPK 在多种细胞中调控代谢反应，但内皮细胞氧化还原信号如何调控 AMPK 尚未完全阐明。本研究采用 RNA 干扰和药理学方法，证明 H2O2 是培养牛主动脉内皮细胞（BAECs）中 AMPK 的关键激活剂。H2O2 处理可快速、显著增加 AMPK 磷酸化，其 EC50 为 65±15 μ...