脱嘌呤/脱嘧啶内切酶1（APE1）可特异性切割DNA中的脱嘌呤/脱嘧啶位点（AP位点），在碱基切除修复和维持基因组稳定性中发挥关键作用。APE1表达异常与心血管疾病、神经系统疾病及多种癌症相关，但现有痕量APE1检测方法在部分应用中仍不理想。为此，作者开发了一种无酶、无标记的超灵敏APE1生物传感平台，将APE1特异性位点识别与杂交...
在活体系统中以极高特异性进行非侵入、实时、纵向蛋白质功能成像，是现代生物医学研究的关键挑战之一。本文报道了一种名为活性蛋白谱-生物发光共振能量转移（ABPP-BRET）的平台融合技术。该方法将活性蛋白谱（ABPP）与生物发光共振能量转移（BRET）相结合，可在活细胞中以实时、纵向方式监测目标蛋白的翻译后修饰与酶活性变化。作者以半合成...
本研究从自展示 Fv 抗体库中筛选血清素样模拟表位，用作单胺氧化酶 A（MAO-A）抑制剂。Fv 抗体对应免疫球蛋白 G（IgG）重链可变区（VH），由三个互补决定区（CDR）和四个框架区（FR）组成。作者通过定点突变随机化 CDR3 的 11 个氨基酸残基构建 Fv 抗体库，并利用大肠杆菌自展示技术表达。以抗血清素单克隆抗体为筛选...
本研究提出一种基于CRISPR/Cas12a检测3′–5′外切酶活性的方法。3′–5′外切酶（Exo III）参与DNA修复、复制校对等细胞过程，其表达失衡与癌症等疾病风险增加相关。作者将Cas12a激活序列构建于发夹探针（HP）的5′端，使探针形成平末端。当HP的3′端被Exo III水解时，原本隐藏的Cas12a激活序列被暴露，...
P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）在肿瘤细胞中高表达可导致多药耐药（MDR），联合 P-gp 抑制剂是逆转 MDR 的潜在策略。本研究建立无标记、无去污剂体系，将表面等离子共振（SPR）生物传感器与苯乙烯马来酸（SMA）聚合物膜蛋白稳定技术结合，用于筛选潜在 P-gp 抑制剂。首先用 SMA 从 MCF-7/AD...
乙酰胆碱酯酶（AChE）是阿尔茨海默病（AD）发生和治疗中的关键酶。本文通过席夫碱反应，以超支化聚乙烯亚胺（PEI）和焦性没食子酸（pyrogallol）在水溶液中自组装，制备了高荧光发射、水溶性非共轭聚合物点（NCPDs）。所采用的一锅法使 NCPDs 制备过程更简便、节能且环境友好。作者系统研究了 NCPDs 的本征荧光机制及其...
本研究开发了一种基于液晶（LC）液滴的传感平台，用于检测羧酸酯酶（carboxylesterase, CES）及其抑制剂。十四酰胆碱氯化物（myristoylcholine chloride, Myr）作为阳离子表面活性剂接触液晶液滴时，使水/液晶界面处的液晶分子呈垂直锚定取向，在偏振光显微镜下呈现暗十字织构。当存在 CES 时，M...
等温核酸扩增技术对现代生物与生物医学中的高灵敏生物传感具有重要意义。本文提出一种简便、稳健的指数滚环扩增（RCA）策略，即通过修复酶与聚合酶共同实现引物重塑扩增（PAJRP），并以尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG）为模型分析物。预先将环状模板（CT）分别与含尿嘧啶发夹探针和含四氢呋喃无碱位点模拟物（AP位点）的荧光淬灭探针（AFP）杂...
亮氨酸氨基肽酶（leucine aminopeptidase, LAP）是一种可水解 N 端含亮氨酸残基的肽或蛋白的水解酶，也是多种病原体致病能力的关键毒力因子，为感染性疾病的诊断和治疗提供了新视角。本研究开发了一种新型荧光探针 DDBL，其以 DDAO 为荧光团、亮氨酸为识别基团，用于 LAP 检测。通过实时视觉传感 LAP，该方...
胰蛋白酶是消化系统中关键的蛋白酶，其异常水平与急性胰腺炎、囊性纤维化和胰腺癌等胰腺疾病相关。本文利用辅酶介导的电接枝含铁氰基聚合物作为新型信号放大策略，报道了一种基于切割的“信号开启”型电化学生物传感器，用于高选择性地检测极低水平的胰蛋白酶活性。传感器构建包括：将无游离羧基的肽底物经N端固定于电极表面；胰蛋白酶特异性切割肽底物；通过...
转录因子（TFs）是调控基因表达的关键蛋白，其水平异常与多种疾病密切相关。本文开发了一种基于CRISPR/Cas12a的荧光生物传感器，用于在核酸外切酶保护实验辅助下定量检测转录因子水平。作者设计了一种双链DNA激活剂，其中嵌入TFs结合域，并包含可激活Cas12a的PAM及crRNA可识别序列。当TFs与激活剂结合时，蛋白-DNA...
本文报道了一种基于目标诱导转录放大触发 CRISPR/Cas13a 反式切割活性的超灵敏碱性磷酸酶（ALP）荧光传感策略（TITAC-Cas）。该体系以整合 T7 启动子（5′-磷酸）和转录模板的双链 DNA（5′P-dsDNA）作为 ALP 底物。无 ALP 时，5′P-dsDNA 被 λ 外切酶（λexo）降解，导致 T7 转录...
本文提出一种基于肽修饰电极的无标记电化学生物传感器，用于监测蛋白激酶A（PKA）活性及其抑制。传感器以半胱氨酸-肯肽（cys-kemptide, CLRRASLG）为底物肽，通过半胱氨酸残基末端巯基在金电极表面自组装固定。当PKA与三磷酸腺苷（ATP）共同作用于固定有cys-kemptide的金电极时，PKA催化ATP末端磷酸基团转...
本文开发了一种无标记电化学方法，用于灵敏测定介导 DNA 去甲基化的十-十一易位蛋白 1（TET1）。该策略主要基于 MspI 介导的限制性内切酶反应。生物传感器在 MspI 切割前后的电流响应差异依赖于 TET1 的活性和浓度。借助金纳米粒子，该方法在 0.0042–0.0210 mg/mL 范围内具有良好的线性，相关系数为 0....
乙酰胆碱酯酶（AChE）在生物信号传递中起关键作用，其异常表达与多种神经退行性疾病相关。本文基于二氧化锰纳米片（MnO2 NSs）的氧化酶样活性，发现 MnO2 NSs 无需过氧化物即可直接氧化硫胺素生成强荧光硫色素。当引入 AChE 后，乙酰硫代胆碱（ATCh）被水解生成硫代胆碱（TCh），TCh 可将 MnO2 NSs 还原为 ...
本文报道了一种用于检测胰蛋白酶的新型传感器，采用专门设计的荧光素标记肽与经酸氧化修饰的带负电荷碳纳米颗粒（CNPs）构建。荧光素标记肽的荧光被CNPs淬灭。传感器与胰蛋白酶反应后，肽链被切割，染料部分释放，荧光强度显著增强，且该增强随胰蛋白酶浓度和反应时间变化，从而可定量胰蛋白酶。相应地，该生物传感器发展出一种简便高效的荧光法测定胰...
本文报道了一种基于二硫化钼纳米片负载金纳米颗粒（MoS2-AuNPs）的电化学DNA（E-DNA）传感器，用于T4多聚核苷酸激酶（PNK）活性的“信号增强”一步检测及抑制剂筛选。该传感器将可切换双链DNA探针固定于MoS2-AuNPs修饰的玻璃碳电极上，利用PNK催化ATP将5′-羟基底物DNA磷酸化，随后λ外切酶识别并切割磷酸化链...
胰蛋白酶是重要的蛋白酶，可作为胰腺炎等病理状态诊断的可靠生物标志物。本文报道一种基于电化学控制聚合物接枝放大策略的新型 signal-on 电化学生物传感器，用于超灵敏检测胰蛋白酶活性。无羧基肽底物 CGGSSRGG-CONH2 先通过 N 端固定于金电极；胰蛋白酶切割肽底物后，在截短肽 C 端产生游离羧基，并通过羧基-Zr(IV)...
DNA腺嘌呤甲基转移酶（Dam MTase）可催化DNA甲基化并影响基因调控，其活性检测对临床诊断和治疗具有重要意义。本研究开发了一种基于甲基化敏感切割引物触发超支滚环扩增（HRCA）的无标记荧光生物传感器，用于检测Dam MTase活性。设计了一种发夹DNA探针（HP），其茎部含有Dam MTase特异性识别序列，作为甲基化底物。...
组蛋白乙酰转移酶（HAT）活性异常会导致多种细胞疾病。本文首次报道一种辅酶A（CoA）适配体辅助的无标记电化学剥离生物传感器，通过方波伏安法（SWV）灵敏检测HAT活性。HAT存在时，可将乙酰辅酶A（Ac-CoA）中的乙酰基转移至底物肽的赖氨酸残基，生成CoA分子。随后，CoA作为引发剂，通过典型靶标-适配体相互作用捕获其适配体，进...