10.3390/molecules31030458
漆酶是一类具有广泛工业应用价值的多功能生物催化剂，其异源表达可实现高效生产、纯化与功能优化。白腐真菌 Hirschioporus abietinus 可分泌一种高效胞外漆酶 Lac2，本研究据此鉴定并克隆了编码该酶的基因。为获得高且稳定的酶产量，作者将 Lac2 基因在毕赤酵母 Pichia pastoris 中表达，并优化培养条件...
Production of codon-optimized Factor C fragment from Tachypleus gigas in the Pichia pastoris GS115 expression system for endotoxin detection.
Factor C（FC）是内毒素检测常用标准材料，作为酶原丝氨酸蛋白酶可充当检测脂多糖（LPS）的生物传感器。前期模拟显示 FC 的 C 型凝集素结构域（CLECT）与脂质 A 相互作用。本研究通过蛋白建模、分子对接、分子动力学模拟及 pPIC9K 载体构建，评估 FC 片段与脂质 A 的相互作用稳定性。三个建模网站所得 FC 模型...
Biosensor-guided rapid screening for improved recombinant protein secretion in Pichia pastoris.
毕赤酵母（Komagataella phaffii）因高分泌能力广泛用于异源蛋白生产，但高产工程菌株筛选仍是限制步骤。尽管已有分子工具箱用于构建设计和基因整合，转化子克隆变异高，常发生多拷贝和随机整合，因此需对数百个转化子进行功能筛选。常规筛选多基于深孔板培养，并对诱导后样品进行免疫印迹或酶活测定，且每种蛋白常需定制检测。本文开发通...
Avoiding entry into intracellular protein degradation pathways by signal mutations increases protein secretion in Pichia pastoris.
本研究针对毕赤酵母（Pichia pastoris）中广泛使用的酿酒酵母 α-交配因子前前导肽（MFα）分泌信号，系统评估了包括 V50A 在内的 20 个单氨基酸替换对重组蛋白分泌的影响。结果显示，V50A、V38A、G40D、L42S、L63S、L64S、F65S 和 I66T 等单突变可显著提高抗溶菌酶单链抗体（scFv）的分...
A Pichia biosensor for high-throughput analyses of compounds that can influence mosquito behavior.
蚊子依靠嗅觉定位宿主并吸血，驱避剂通过干扰气味识别的生化级联发挥作用，是控制蚊媒疾病传播的高效、低成本手段。然而，传统驱避剂发现依赖嗅觉仪等行为学实验，速度慢、通量低且易出错。为此，作者构建了一种原型全细胞生物传感器，用于快速、准确检测可改变蚊子行为的化合物，尤其是驱避剂。作为概念验证，他们通过遗传工程使毕赤酵母 Pichia pa...
Biosensor-assisted engineering of a high-yield Pichia pastoris cell-free protein synthesis platform.
无细胞蛋白合成（CFPS）因合成生物学发展而重新受到关注，不同宿主裂解液可利用细胞内生物合成、蛋白折叠和翻译后修饰能力。本文报道了一种基于毕赤酵母（Pichia pastoris，Komagataella phaffi）的 CFPS 平台。作者构建了新型核糖体生物传感器，将核糖体相关基因启动子与 sfGFP 报告基因融合，通过流式细...
A Pichia pastoris single-cell biosensor for detection of enzymatically produced methanol.
本研究对甲基营养酵母毕赤酵母（Pichia pastoris）进行单细胞分析，开发了一种用于检测异源酶产生甲醇的生物传感器。该传感器中，甲醇及其后续代谢产物可诱导位于甲醇诱导型启动子控制下的荧光蛋白基因表达。通过荧光显微图像定量分析，作者筛选了甲醇诱导型启动子与宿主菌株，并优化预培养和检测条件，以提高甲醇检出限。流式细胞分选（FAC...
Expression of CotA laccase in Pichia pastoris and its electrocatalytic sensing application for hydrogen peroxide.
本研究将枯草芽孢杆菌WD23的CotA漆酶基因克隆至毕赤酵母pPICZαB载体，在AOX1启动子和α-factor分泌信号驱动下实现分泌表达，培养上清酶活达891.2 U/L，并经离子交换与凝胶过滤纯化至均一。重组CotA漆酶对ABTS、SGZ和2,6-DMP氧化的最适pH分别为4.6、6.6和6.8，以SGZ为底物时最适温度为80...
Development of a simple bioelectrode for the electrochemical detection of hydrogen peroxide using Pichia pastoris catalase immobilized on gold nanoparticle nanotubes and polythiophene hybrid.
本文提出一种简单新颖的电化学过氧化氢生物传感器，采用毕赤酵母来源过氧化氢酶（CATpp）作为生物电催化剂。该酶通过 EDC–NHS 偶联试剂固定于金纳米颗粒纳米管（AuNPNTs）与聚噻吩（PTh）复合材料上。作者用超声辐照法合成金纳米颗粒（AuNPs），并经牺牲模板法获得管状 AuNPNTs。AuNPNTs 通过 S–Au 化学吸...
Recombinantly produced cellobiose dehydrogenase from Corynascus thermophilus for glucose biosensors and biofuel cells.
纤维二糖脱氢酶（CDH）是生物电催化领域的新兴酶。其柔性细胞色素域可作为内置氧化还原介质，使CDH能够与电极表面发生直接电子转移（DET），从而用于无介质的“第三代”生物传感器。热腐生镰刀菌（Corynascus thermophilus）CDH能在生理条件下氧化葡萄糖，是微型葡萄糖生物传感器或葡萄糖驱动生物燃料电池阳极的候选酶。本...