Genetically Encoded, pH-Sensitive mTFP1 Biosensor for Probing Lysosomal pH.
溶酶体是细胞内大分子降解的关键场所，其腔内 pH 通常约为 4.5。为更准确地研究溶酶体 pH，作者设计了一种新型基因编码荧光蛋白 pH 生物传感器 FIRE-pHLy。该传感器通过溶酶体相关膜蛋白 1（LAMP1）靶向溶酶体膜，并利用单体青色荧光蛋白 1（mTFP1）作为腔侧 pH 敏感报告域，在 pH 3.5–6.0 范围内报告...
Dynamic analysis of 4E-BP1 phosphorylation in neurons with Tsc2 or Depdc5 knockout.
TSC1或TSC2突变导致结节性硬化症（TSC），引起mTOR过度激活，表现为S6和4E-BP1过度磷酸化。氨基酸水平调节非神经细胞mTOR依赖的S6和4E-BP1磷酸化，但在神经元中研究不足。本研究在Tsc2和Depdc5 CRISPR编辑的Neuro2a（N2a）细胞及分化神经元中，分析氨基酸水平对mTOR信号和S6、4E-BP...
Quantitative in vivo imaging of neuronal glucose concentrations with a genetically encoded fluorescence lifetime sensor.
葡萄糖是大脑必需的能量来源。基因编码荧光生物传感器可实时观察单个神经元和星形胶质细胞的葡萄糖动态，但即使对比率型传感器，也缺乏将测量值转换为离体脑组织或活体实际浓度的实用方法。荧光寿命成像提供了克服该问题的策略。此前作者报道了荧光寿命葡萄糖传感器 iGlucoSnFR-TS（曾用名 SweetieTS），用于监测刺激引起的神经元葡萄...
Inhibition of bioenergetics provides novel insights into recruitment of PINK1-dependent neuronal mitophagy.
受损线粒体参与神经病理过程，使线粒体自噬受到关注。本研究通过药物抑制原代小鼠小脑颗粒神经元（CGCs）线粒体呼吸链，探讨神经元线粒体自噬的触发因素。分别用鱼藤酮（Rot）、3-硝基丙酸（3-NP）、抗霉素A（AA）和氰化钾（KCN）抑制复合物I、II、III和IV，并依据细胞活力、突起损伤、质膜通透性和氧化磷酸化确定产生缓慢细胞死亡...
Synchronous Bioimaging of Intracellular pH and Chloride Based on LSS Fluorescent Protein.
离子稳态调控活细胞关键生理过程。胞内氯离子不仅参与静息细胞膜电位设定，也调节网络活动中的动态电压变化。动态氯成像需要更快的采集速率，并准确校正伴随的 pH 变化。作者将长斯托克斯位移红色荧光蛋白 LSSmKate2 与对 pH 和氯离子高敏感的 GFP 变体 E2GFP 融合，获得基因编码荧光生物传感器 LSSmClopHensor...
PDE4 control on cAMP/PKA compartmentation revealed by biosensor imaging in neurons.
本研究在啮齿动物脑切片中结合电生理记录与新型荧光生物传感器成像，实时监测单个神经元内蛋白激酶A（PKA）的激活。电生理以慢后超极化钾电流（I_sAHP）作为膜水平PKA磷酸化事件的指标；生物传感器包括基于Epac的cAMP探针（Epac1-camps、Epac2-camps300）和基于AKAR的PKA活性探针（AKAR2.2、AK...