Identification of novel genetic factors that regulate c-di-AMP production in
核苷酸第二信使使细菌快速响应环境变化。环二腺苷酸（c-di-AMP）是金黄色葡萄球菌生长所必需的第二信使，参与钾离子、渗透压溶质摄取及β-内酰胺抗性调控。其胞内浓度主要由合成酶DacA和水解酶GdpP决定，但其他调控因子有限。本研究构建由枯草芽孢杆菌kimA c-di-AMP结合核糖开关与yfp报告基因组成的荧光生物传感器，用于检测...
Nomad Biosensors: A New Multiplexed Technology for the Screening of GPCR Ligands.
本文报道了用于多重高通量细胞G蛋白偶联受体（GPCR）检测的Nomad技术。该技术包含一组名为Nomad Biosensors的荧光生物传感器，可通过G蛋白与第二信使转导蛋白的相互作用，测量GPCR激活后的细胞响应。GPCR是欧几里得生物中最大的膜受体家族之一，其信号转导参与多种生理过程，并与多种疾病相关，是药物研发的重要靶点。No...
FRET Microscopy for Real-Time Visualization of Second Messengers in Living Cells.
FRET（Förster 共振能量转移）显微镜是分子生物学与医学研究中用于实时监测和定量蛋白质-蛋白质相互作用及生化过程的重要工具。该技术可在完整细胞、组织乃至亚细胞区室中研究多种新型信号转导机制。典型单分子荧光生物传感器由目标分子结合域和分别位于两侧的供体与受体荧光蛋白组成；供体在单波长光激发下发射能量，可部分转移至邻近受体，使受...
Hybrid promiscuous (Hypr) GGDEF enzymes produce cyclic AMP-GMP (3', 3'-cGAMP).
30多年前，含GGDEF结构域的酶被证明是二鸟苷酸环化酶，可产生环二鸟苷酸（cdiG），后者作为第二信使调控细菌从运动状态向定殖生物膜状态的转变。此后，GGDEF蛋白基因在细菌基因组中广泛存在，确立了cdiG信号在细菌中的主导地位。然而，变形菌编码大量GGDEF蛋白，某些情况下接近编码序列的1%，这引发细菌为何需要如此多GGDEF酶...
Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.
转基因小鼠在现代生物医学研究中具有重要作用，不仅可用于解析特定基因和蛋白功能，还可作为表达荧光生物传感器的工具，在活细胞中实时报告第二信使水平和生化过程。本章提供构建质粒载体并生成表达FRET生物传感器的转基因小鼠的详细方案。该传感器为基于Förster共振能量转移（FRET）的cAMP生物传感器Epac1-camps，由cAMP结...
Blue fluorescent cGMP sensor for multiparameter fluorescence imaging.
环磷酸鸟苷（cGMP）通过与环磷酸腺苷（cAMP）和钙离子（Ca2+）等信号分子协同作用，调节多种生理过程。基于荧光蛋白荧光共振能量转移（FRET）的cGMP遗传编码传感器已被开发，但现有传感器光谱重叠严重，难以在单细胞中联合使用。单波长指示剂是避免该问题的有效替代方案，但基于单一荧光蛋白的生物传感器颜色变体有限。本研究利用暗FRE...