本研究构建了靶向肌钙蛋白I（TnI）和磷酸兰尼蛋白（PLB）/AKAP18δ的荧光共振能量转移（FRET）cGMP生物传感器，用于实时监测成年大鼠心肌细胞中cGMP的亚细胞区室化。C型利钠肽（CNP）刺激GC-B/NPR-B后，TnI和PLB附近cGMP均升高；脑钠肽（BNP）刺激GC-A/NPR-A仅升高PLB附近cGMP，而不升...
环磷酸鸟苷（cGMP）是人体内重要的信号分子。荧光 cGMP 生物传感器已成为在单细胞水平灵敏分析 cGMP 通路的重要工具。本文首先概述 cGMP 在生理、病理及药物治疗中的多重作用，随后总结 cGMP 实时成像对理解内源性 cGMP 信号和药物作用提供的新认识，重点聚焦心血管系统。cGMP 生物传感器的应用带来若干概念性进展，例...
本文采用基于配体的策略，对源自 COX-2 抑制剂塞来昔布的三取代吡唑啉骨架进行系统修饰，开发新型 PDE5 抑制剂。所获新型吡唑啉具有强效 PDE5 抑制活性且缺乏 COX-2 抑制活性。化合物 d12 活性最高，IC50 为 1 nM，比西地那非强 3 倍，并对其他 PDE 同工酶具有 >10,000 倍选择性指数。西地那非可抑...
一氧化氮（NO）激活 NO 敏感可溶性鸟苷酸环化酶（NO-GC/sGC），触发涉及 cGMP 的细胞内信号通路。对耳蜗毛细胞存活和听力维持，NO 介导级联既有保护也有损害潜力。本研究检测缺乏两种 NO 敏感鸟苷酸环化酶异构体之一的小鼠（NO-GC1 或 NO-GC2 敲除）的耳蜗功能。NO-GC1 或 NO-GC2 缺失不影响噪声暴...
环磷酸鸟苷（cGMP）是心血管系统重要信号分子和药物靶点，血管一氧化氮（NO）-cGMP通路激活可引起血管舒张，但cGMP信号在健康、疾病及cGMP升高药物治疗中的时空动态，以及特定心血管细胞类型内的cGMP浓度仍不清楚。为在体内分析cGMP信号，作者构建了表达荧光共振能量转移（FRET）型cGMP传感器蛋白的转基因小鼠，并描述了两...
3',5'-环磷酸鸟苷（cGMP）是调节心肌收缩力并保护心脏免于病理性肥厚的重要第二信使，但成体心肌细胞中 cGMP 浓度低且区室化，缺乏实时成像手段。本研究构建心肌细胞特异性表达高敏胞质 FRET 型 cGMP 生物传感器 red cGES-DE5 的转基因小鼠，并首次在完整成年小鼠心室肌细胞中完成 cGMP 的 FRET 测量。...
基因编码生物传感器可实时解析细胞信号。作者改进基于 EGFP 的 cGMP 荧光传感器 FlincG，发现质粒转染 HEK293T 细胞后荧光弱或无，而腺病毒感染成功。测序显示两种构建体在 EGFP 域均有突变，且 C 端 17 氨基酸尾与已发表序列不同。在稳定表达 NO 激活鸟苷酸环化酶和 PDE5 的 HEK293T 细胞中，系...
在哺乳动物细胞中实时、非侵入地成像胞内第二信使，同时保持其体内表型，需要结构精密的生物传感器。本文提供了在主动脉血管平滑肌细胞中使用单波长cGMP生物传感器δ-FlincG的方法学。δ-FlincG由含两个cGMP结合域的蛋白激酶GIα（PKGIα）调节域片段与环状置换EGFP（cpEGFP）融合而成，cGMP结合引起荧光强度变化，...
一氧化氮（NO）是体内广泛存在的可扩散神经递质，通过结合含鸟苷酸环化酶（GC）转导域的受体，使靶细胞中 cGMP 积累。尽管该通路重要，但其在生理 NO 浓度下的实时机制仍不清楚。本研究利用新型 cGMP 荧光生物传感器 δ-FlincG，将其表达于含有不同水平 NO 激活 GC 和 cGMP 水解磷酸二酯酶（PDE）活性的细胞中，...
环磷酸鸟苷（cGMP）通过与环磷酸腺苷（cAMP）和钙离子（Ca2+）等信号分子协同作用，调节多种生理过程。基于荧光蛋白荧光共振能量转移（FRET）的cGMP遗传编码传感器已被开发，但现有传感器光谱重叠严重，难以在单细胞中联合使用。单波长指示剂是避免该问题的有效替代方案，但基于单一荧光蛋白的生物传感器颜色变体有限。本研究利用暗FRE...