Intracellular VHHs to monitor and modulate GPCR signaling.
单域抗体片段（VHH，又称纳米抗体）因分子量小、可进入隐蔽表位，在药物研发和细胞内过程研究中具有独特优势。已有细胞内VHH主要靶向胞质蛋白或转录因子，而靶向膜蛋白、尤其是G蛋白偶联受体（GPCR）的VHH较少。GPCR参与多种生理反应，是重要治疗靶点，但其构象复杂性长期阻碍药理学与结构解析。2010年代初以来，细胞内VHH被用于稳定...
Identification and characterization of nanobodies specifically against African swine fever virus major capsid protein p72.
非洲猪瘟病毒（ASFV）是一种大型复杂DNA病毒，其主要衣壳蛋白p72构成病毒最外层二十面体衣壳。本研究通过噬菌体展示技术从骆驼免疫VHH库中筛选抗ASFV p72蛋白的纳米抗体。根据互补决定区（CDR）序列，共鉴定出9个不同纳米抗体，并含有框架区2（FR2）典型氨基酸替换。其中6个在大肠杆菌中成功表达，并评估其对p72的特异性和亲...
Modeling native and seeded Synuclein aggregation and related cellular dysfunctions in dopaminergic neurons derived by a new set of isogenic iPSC lines with SNCA multiplications.
SNCA 基因三倍体是早发型、侵袭性帕金森病的罕见遗传病因。本研究从两名携带新近报道的紧凑 SNCA 三倍体、表现为严重运动障碍、精神症状和认知下降的同胞患者外周血单核细胞出发，利用非整合仙台病毒重编程获得诱导多能干细胞（iPSC）。通过 CRISPR/Cas9 在每条 SNCA 拷贝中引入移码 indel 突变，构建了从 4 个到...
Genetically encoded fluorescent biosensors for GPCR research.
G蛋白偶联受体（GPCR）调控广泛生理与病理生理过程，理解其在不同细胞环境中的激活与功能至关重要。GPCR 激活受胞外刺激动态调控，且新证据显示其可在内体等细胞器中发挥亚细胞功能，因此需要高时空分辨率精确监测 GPCR 激活过程。本综述介绍可在活细胞中实时监测 GPCR 激活的遗传编码荧光生物传感器，覆盖胞外配体结合、GPCR 构象...
Structural insights into the binding of nanobody Rh57 to active RhoA-GTP.
RhoA 是一种小 GTP 酶，作为分子开关发挥作用。当与三磷酸鸟苷（GTP）结合时，RhoA 可激活多条关键信号通路。近期，纳米抗体 Rh57 被报道可特异性结合 GTP 结合的活性 RhoA，并被开发为无细胞毒性的 BRET 生物传感器。为进一步阐明 Rh57 的作用机制，作者共表达、纯化并结晶了 RhoA-Rh57 纳米抗体复...
Emerging trends in developing biosensor techniques to undertake plant phosphoproteomic analysis.
蛋白质修饰尤其是磷酸化受复杂机制调控，使蛋白质获得功能构象，并在外界环境刺激和激素信号过程中调节重要生物学过程。磷酸化蛋白质组学是蛋白质组学中有前景的领域，用于鉴定含磷酸基团的蛋白质及其对蛋白质结构、功能和定位的影响。能够定量检测蛋白质及其翻译后修饰（PTM）的技术极大促进了对蛋白质结构与功能动态的理解。生物传感器系统是一种较新的生...
Biosensors Monitor Ligand-Selective Effects at Kappa Opioid Receptors.
κ阿片受体（KOR）是疼痛和瘙痒治疗的重要靶点。由于偏倚激动剂可在细胞水平优先激活特定下游通路，有望保留镇痛和抗瘙痒作用并减少镇静与不适感，直接测量激动剂在受体水平的效应具有重要意义。本文讨论利用与KOR相互作用的构象特异性胞内生物传感器直接评估配体选择性效应的策略。这些生物传感器与内源信号机制解耦，可在活细胞中提供配体效应的直接受...