本文提出一种用于全面定量自噬起始的实验方案，基于 LC3B Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器的读出。该传感器在 proLC3B 的 N 端和 C 端分别融合供体荧光蛋白 Aquamarine 和受体荧光蛋白 tdLanYFP；当 ATG4B 无活性时，proLC3B 保持完整，供体与受体距离较近而发生 FRET；A...
尽管多种巨自噬机制已被解析，活细胞实时追踪仍困难。ATG4B 蛋白酶对 MAP1LC3B/LC3B 进行 C 端切割（priming），是自噬激活早期事件。由于缺乏活细胞报告子，作者开发了响应 LC3B 被 ATG4B priming 的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器。该传感器由 pH 耐受的供体-受体对 Aq...
溶酶体是负责降解多种大分子的细胞器，其腔内高度酸性环境对溶酶体酶发挥最佳功能至关重要；溶酶体腔内酸性丧失会破坏细胞蛋白稳态，并与神经退行性变等年龄相关疾病相关。本研究利用一种新型稳健的溶酶体 pH 生物传感器 FIRE-pHLy，建立了基于细胞的荧光检测，用于高通量筛选，并将其应用于分化的 SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞。研究目标...
单分子GTP酶RalB由RalGEF激活，调控自噬与侵袭，但其多功能性机制不清。作者发现RalGEF RGL2除促进侵袭外，也是自噬所必需。他们开发自动图像分析方法Endomapper，用一个通道分割内膜区室、另一通道测量目标蛋白强度，并生成随机伪区室校正偶然共定位，以定量内源RGL2与RalB在早期内体、循环内体、自噬体和反式高尔...
线粒体是真核细胞主要的能量产生中心，并参与脂质代谢、钙缓冲和凋亡等关键过程，其功能障碍会破坏细胞稳态。线粒体自噬通过选择性隔离受损或功能异常的线粒体，将其转运至溶酶体降解，从而维持细胞功能并影响寿命。本文以秀丽隐杆线虫为模型，介绍在活体中定量监测线粒体自噬事件的实验方法。作者利用体壁肌细胞中表达的荧光报告系统，通过共聚焦或荧光显微镜...