Simultaneous detection of membrane contact dynamics and associated Ca
膜接触位点(MCSs)是细胞器协调功能的纳米级界面,但其动态性和微小尺寸使现有成像技术难以解析。作者设计了一系列可逆化学遗传报告分子,采用改进的低亲和力 splitFAST/RspA-splitFAST 变体,在体外和体内以高时空分辨率研究不同 MCS 的动态。这些探针可检测内质网-线粒体、内质网-质膜和质膜-线粒体接触,能追踪融合...
膜接触位点(MCSs)是细胞器协调功能的纳米级界面,但其动态性和微小尺寸使现有成像技术难以解析。作者设计了一系列可逆化学遗传报告分子,采用改进的低亲和力 splitFAST/RspA-splitFAST 变体,在体外和体内以高时空分辨率研究不同 MCS 的动态。这些探针可检测内质网-线粒体、内质网-质膜和质膜-线粒体接触,能追踪融合...
DNA甲基化通过调控基因转录和异染色质形成影响细胞与环境的相互作用,但调控重复序列甲基化分布的胞外信号仍不清楚。重复元件富含甲基化,活细胞中研究其甲基化存在方法学困难。本研究利用基于CRISPR/dCas9荧光互补的BiAD传感器,在活细胞中实时读取人类α-卫星重复序列的DNA甲基化。作者将该传感器稳定表达于未转化乳腺上皮细胞MCF...
随着 RNA 丰度在细胞功能研究中作用增加,迫切需要相应工具阐明天然 RNA 的功能与动态,尤其是活细胞中短、低丰度 RNA。荧光 RNA 适配体为构建 RNA 标签和生物传感器装置提供了有用策略。Corn 可与 3,5-二氟-4-羟基苄叉咪唑啉酮-2-肟(DFHO)结合,因其光稳定性增强和光谱红移,是良好的 RNA 标签候选。本文...
绿色荧光蛋白(GFP)经分子工程改造为稳定且折叠鲁棒的超级折叠GFP(sfGFP),显著推动了生物传感器开发和荧光标记在生物学中的应用。基于sfGFP的自组装双片段split-FP系统被广泛用于在体外监测可溶性蛋白表达,并在细胞内追踪蛋白定位与转运。近年来发展的三片段split-FP系统依赖三个GFP片段的自组装,尤其适合检测蛋白-...
单体近红外(NIR)荧光蛋白(FPs)作为蛋白标签和生物传感器组件,在深组织成像与多色显微中需求很高。作者从细菌光敏色素工程化得到三个亮、光谱可区分的单体近红外荧光蛋白,称为 miRFPs,可像 GFP 类荧光蛋白一样使用,仅依赖内源胆绿素。miRFPs 在哺乳动物细胞中比其它单体近红外荧光蛋白亮 2–5 倍,蛋白融合定位良好,支持...
雌激素类化合物是一类重要的激素物质,可来源于药物、人和动物排泄物、化学工业及微生物代谢,并作为环境污染物存在。本文报道了一种基于荧光蛋白片段互补的分子生物传感器,用于监测此类化合物。作者将单体黄色荧光蛋白 mVenus 分裂为 N 端片段 Vn(1–154) 和 C 端片段 Vc(155–239),并将其分别融合在雌激素受体 α (...