Cell reports methods
2024
Li X, Wen X, Tang W, Wang C 等 8 人
葡萄糖代谢机制虽已阐明多年,但糖酵解中间代谢物的亚细胞分布、转运与功能仍存在未解问题,需要在活细胞和体内实现高时空分辨率的代谢监测。遗传编码荧光传感器可在活细胞和动物体内特异性、灵敏且时空分辨地监测代谢物,近年已开发数十种葡萄糖代谢物传感器。本文强调追踪糖酵解特定中间代谢物、测量糖酵解通量、监测其时空动态并定量代谢物丰度的重要性,随...
STAR protocols
2024
Gökerküçük EB, Tramier M, Bertolin G
本文提出一种用于全面定量自噬起始的实验方案,基于 LC3B Förster 共振能量转移(FRET)生物传感器的读出。该传感器在 proLC3B 的 N 端和 C 端分别融合供体荧光蛋白 Aquamarine 和受体荧光蛋白 tdLanYFP;当 ATG4B 无活性时,proLC3B 保持完整,供体与受体距离较近而发生 FRET;A...
Scientific reports
2024
Groschup B, Calandra GM, Raitmayr C, Shrouder J 等 13 人
神经元活动伴随钾离子(K+)从胞内向胞外净流出。尽管胞外 K+ 变化已被充分描述,但由于缺乏相应探针,胞内动态研究较少。本研究表征了基于 FRET 的基因编码 K+ 生物传感器 lc-LysM GEPII 1.0 在体外原代培养神经元和活体小鼠皮层神经元中测量胞内 [K+] 变化的能力。结果显示,lc-LysM GEPII 1.0 ...
Cell reports methods
2024
Mehl BP, Vairaprakash P, Li L, Hinde E 等 9 人
本文研究环境敏感荧光染料在荧光寿命成像显微镜(FLIM)生物传感器中的应用。作者筛选了一系列 merocyanine 染料,寻找环境诱导荧光寿命变化、光稳定性和亮度在活细胞成像波长下的最佳组合。最终构建 mero87-CBD 生物传感器,将环境敏感染料通过半胱氨酸反应性连接基共价连接至选择性结合激活态 Cdc42 的亲和试剂(WAS...