枯草芽孢杆菌是工业生物技术中重要的重组蛋白分泌宿主，但高效分泌仍需优化，且并非所有目标蛋白均可用活性法筛选。为此，作者开发了组合在线监测系统，包括活性非依赖的体内分裂GFP（split GFP）检测法和基于mCherry的分泌应激生物传感器。split GFP法将目标蛋白与sfGFP第11个β-折叠（GFP11）融合，使其与缺失该β...
细菌蛋白分泌到培养上清可简化下游纯化，但高效分泌需要筛选信号肽与目标蛋白组合，且受表达效率和培养条件影响。本研究建立两套自动化工作流，用于谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）中腐皮镰刀菌梨孢型（Fusarium solani f. sp. pisi）角质酶的异源分泌菌株构建与高通量筛选。利用 Open...
谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）是重要的重组蛋白分泌平台。作者利用此前建立的基于增强型黄色荧光蛋白（eYFP）的全细胞报告菌株，通过监测 Sec 依赖蛋白分泌引发的分泌应激，定量评估异源角质酶（cutinase）的分泌。实验中分别采用表现较弱的 PelSP 和较强的 NprESP 信号肽驱动 cu...
未折叠蛋白反应（UPR）是真核细胞应对内质网（ER）应激的高度保守反应，通常由未折叠蛋白积累触发。除与癌症等疾病相关外，UPR 诱导对真核细胞工厂的重组蛋白生产有显著影响，包括工业酵母酿酒酵母。能在单细胞水平准确检测和测量 ER 应激，有助于快速优化蛋白生产条件并实现高通量菌株筛选。现有监测酿酒酵母 UPR 的方法常与培养阶段在时间...
保留利用选择性钩（RUSH）系统可通过将荧光生物传感器（如绿色荧光蛋白 GFP 与链霉亲和素结合肽 SBP 的融合蛋白）定位到不同亚细胞区室，并利用过量链霉亲和素将其保留；加入生物素后竞争性破坏该相互作用，使生物传感器从“钩”上释放。本研究构建稳定共表达可溶性分泌型 SBP-GFP（ss-SBP-GFP）和内质网腔定位链霉亲和素的人...