丙二酰辅酶A（malonyl-CoA）是多种生物化学物与生物燃料合成的关键前体，在酿酒酵母中由乙酰辅酶A羧化酶Acc1p催化生成，并受Snf1蛋白激酶磷酸化负调控，导致胞内水平较低，限制下游产物合成。本研究设计了一种合成malonyl-CoA荧光生物传感器，以细菌转录因子FapR、fapO操纵子和yeGFP报告基因为核心，通过TEF...
B型周期蛋白依赖性激酶活性必须在有丝分裂退出和G1稳定时关闭。B型周期蛋白的降解由后期促进复合物/环体（APC/C）介导；在有丝分裂退出期间及之后，APC/C依赖Cdh1。Cdh1又在新细胞周期Start转换时被周期蛋白-CDK磷酸化并失活。我们开发了一种生物传感器，用于评估APC/C-Cdh1的细胞周期动态。G1转录抑制因子Whi...
FMN结合荧光蛋白（FbFPs）由于氧独立性、体积小和成熟快而优于GFP及其衍生物。FbFPs已成功用作原核和真核细胞质中基因表达的可靠报告蛋白。本文扩展了前期关于密码子适配的CaFbFP变体的发现，该变体在非致病酵母酿酒酵母和人类真菌病原体白色念珠菌中发挥作用。在这两种真菌中，CaFbFP可通过内源信号（H2B-/Aga2-融合）...
在微生物宿主中建立异源合成途径以高滴度和高收率生产工业化学品，需要高效调整中心碳代谢，使代谢通量导向目标产物。这可通过对代谢网络关键分支点的调控实现。本文提出一种围绕关键中间物丙二酰辅酶A（malonyl-CoA）的层级动态控制新方法，用于动态调节途径通量和酶表达水平。控制系统的上层通过下调 malonyl-CoA 用于脂肪酸合成的...
苯基异喹啉生物碱（BIAs）是一类结构复杂的植物次生代谢产物，包括吗啡、可待因等药物。微生物合成有望替代传统植物提取。本文在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中实现了关键中间体(S)-reticuline从葡萄糖的生物合成。为此，作者开发了一种酶联L-DOPA生物传感器：利用植物DOPA二氧合酶（DOD）将...
定向进化是提升低活性酶催化能力的重要策略，尤其适用于酶被改造以接受新底物或适应新环境的情形。由于酶活性强烈依赖其微环境，筛选条件应尽量接近最终应用场景。当目标酶需要在活细胞内发挥作用时，RNA 生物传感器可将难以直接测量的代谢表型，即目标小分子的生成，与易于检测的荧光表型相连接，从而在活细胞内实现高通量筛选。本文介绍了一种基于合成 ...
Ras蛋白在进化中高度保守，是真核细胞多条信号通路的汇聚点，参与糖异生与发酵生长转换、储存碳水化合物分解、胁迫耐受、生长控制、寿命决定、形态发生与发育等过程。它们属于小GTP酶超家族，GTP结合态为活性形式，GDP结合态为失活形式。为研究Ras蛋白激活状态以阐明Ras介导信号转导机制，本文提供一种简单、灵敏且可靠的方法，基于Ras-...
自噬在多种条件下参与细胞组分周转，既是稳态维持机制，也是质量控制机制，可选择性降解包括细胞器在内的细胞物质。若受损或多余线粒体未被清除，可能威胁细胞稳态与存活。在酿酒酵母中，营养缺乏（如氮饥饿）或损伤可诱导线粒体选择性自噬，即线粒体自噬。本文描述一种简单荧光显微镜方法，用于评估酵母细胞中的自噬，并重点展示监测线粒体自噬。该方法使用双...