生物传感器是合成生物学中调控基因表达的重要工具。配体响应型转录因子可将胞内代谢物浓度与基因表达偶联，用于动态调控和高通量代谢物生产株筛选。本研究建立酿酒酵母WAR1转录调控因子与PDR12启动子构成的有机酸生物传感器，用于检测莽草酸途径产生的对羟基苯甲酸（PHBA），并以绿色荧光蛋白（GFP）表达作为输出。通过将WAR1转录调控因子...
细胞周期依赖性激酶（CDK）是癌症治疗的重要靶点，但临床候选抑制剂多靶向 ATP 结合口袋，选择性有限且易产生耐药。靶向蛋白激酶构象可塑性的别构抑制剂具有更好前景。本文针对 CDK2 激酶 T-loop 动态，构建了一种荧光生物传感器 CDKCONF，可特异性报告 CDK2 激活环构象变化，并对 ATP 或 ATP 竞争性抑制剂不敏...
基于蛋白的荧光生物传感器可在生理条件下高灵敏定量检测生物分子或药物，但传统构建方法通常依赖高分辨结构或氨基酸序列信息，限制了其在结构复杂膜受体中的应用。为克服该限制，作者发展了将配体导向化学与双分子荧光淬灭-恢复（BFQR）系统相结合的新策略，可将多种膜结合受体转化为“开启型”荧光传感器。本文以 γ-氨基丁酸 A 型受体（GABAA...
乙酰辅酶A是细胞重要中间代谢物，也是多种工业代谢物的前体。甲基杆菌 Methylobacterium extorquens AM1 能以甲醇为唯一碳源，具有丰富辅酶A代谢流，但乙酰辅酶A位于丝氨酸循环、三羧酸循环和乙基丙二酰辅酶A循环等中心代谢路径交汇处，难以高效积累。本文提出传感器辅助转录调控因子工程（SATRE）策略，在引入甲羟...
本研究建立了一种稳健的高通量筛选（HTS）策略，用于发现靶向肌浆/内质网钙ATP酶（SERCA）的小分子效应物。该策略基于荧光微孔板读取器，可同时高精度、高速记录纳秒荧光衰减波形（寿命模式）与完整发射光谱（光谱模式）。作者利用光谱解混微孔板读取器（SUPR），在活细胞中表达荧光共振能量转移（FRET）生物传感器，筛选小分子化合物库。...
我们开发了一种可在真实高通量筛选（HTS）条件下逐孔记录完整高质量荧光发射光谱的微孔板读数仪，整板384孔读取时间少于3分钟。该仪器特别适合基于荧光共振能量转移（FRET）的活细胞检测。在HEK293细胞中稳定表达并研究了两色SERCA（2CS）分子内FRET生物传感器，其绿色荧光蛋白（GFP）供体与红色荧光蛋白（RFP）受体位于对...