为满足食品安全日益增长的需求，本研究构建了一种基于全细胞的系统，用于检测意面生产链中的钴污染。该系统基于携带 eGFP 基因的工程化细菌，eGFP 受启动子序列控制，被激活时产生荧光信号。研究测试了四个应激响应基因（DnaK、GroE、UspA 和 ZntA）启动子对钴的响应，最终选择编码通用应激蛋白的 UspA 启动子。UspA ...
苹果酸是三羧酸循环关键中间代谢物，在医药和食品中有重要用途，但微生物合成法仍处于早期阶段。代谢工程中的关键问题之一是苹果酸动态且细微的变化难以检测，亟需直接、精确检测微生物代谢中苹果酸的技术，以支持工程菌株高通量筛选。本研究在地衣芽孢杆菌中构建了响应苹果酸的遗传编码生物传感器。首先鉴定关键调控子 MalR 及传感器作用位点，随后通过...
增强绿色荧光蛋白（EGFP）具有强而天然的荧光，在生物医学研究中广泛用作生物标志物，但作为生物传感器时，其结构和在不利环境中的行为认识不足。本研究利用三维荧光光谱、圆二色（CD）和小角X射线散射（SAXS）系统评估不同 pH 下 EGFP 的荧光活性与结构变化，并重点考察 pH 诱导荧光猝灭的可逆性，以期为开发生物相容的 pH 生物...
丙烯酸（AA）是一种广泛使用的商品化学品，传统上由不可再生化石燃料来源制备。为发展绿色生物基丙烯酸生产，需要能够快速、简便检测活细胞内 AA 生成的传感工具。本研究开发了一种新型转录生物传感器，用于在体内检测丙烯酸。通过对暴露于亚致死剂量丙烯酸的大肠杆菌进行 RNA-seq 分析，鉴定到一个选择性响应启动子 PyhcN，并将其克隆至...
基于微生物细胞的全细胞生物传感器通常依赖应激响应操纵子，用于监测环境污染物。与传统仪器分析相比，生物传感器更便捷、成本更低，但可检测目标受限于有限的遗传操纵子系统。本研究提出一种新策略，通过工程化增强绿色荧光蛋白（eGFP）克服该限制。已知 split-eGFP 的两个片段可重新结合形成天然荧光结构，因此作者在 eGFP 的 β-链...
脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）是革兰氏阴性菌外膜的特征性成分，可作为细菌污染的有效生物标志物。本文报道了一种基于 293/hTLR4A-MD2-CD14 细胞的绿色荧光生物传感器，用于在 96 孔微孔板中非破坏、用户友好且高效地检测和鉴定 LPS。作者将关键信号通路基因 ZC3H12A（编码 MCPIP1 ...
本研究提出一种利用 L-赖氨酸诱导型启动子进化大肠杆菌赖氨酸工业菌株的新方法。以该启动子控制的增强绿色荧光蛋白（EGFP）胞内表达水平为表型，从由 L-赖氨酸高产大肠杆菌菌株经诱变获得的 10^7 突变库中，通过流式细胞分选（FACS）初步筛选出 186 株。随后依据赖氨酸浓度、赖氨酸产率以及 96 深孔板中单位细胞产率等多参数对 ...
睾酮可被 Comamonas testosteroni 降解，其 3,17β-羟基类固醇脱氢酶（3,17b-HSD）是睾酮诱导的关键酶，属于短链脱氢酶/还原酶（SDR）超家族。研究发现 bhsd 基因上游 2.4 kb 调控片段可响应类固醇并启动 bhsd 表达。为将该顺式调控元件用于类固醇检测，构建了 pK2.4-EGFP-4 和...
生物传感器对灵敏度和特异性的不断提高，使多价生物受体成为研究热点。在噬菌体亲和肽领域，整个噬菌体颗粒可被用作受体，而非仅使用单个展示肽。然而，完整噬菌体颗粒的结合动力学尚未得到系统研究，而这对于设计高效应用至关重要。本文利用自研光纤表面等离子共振（FO-SPR）生物传感器，研究展示肽库的噬菌体对增强绿色荧光蛋白（eGFP）的亲和力与...
本研究结合水凝胶、微流控装置和化学聚合方法，制备了包埋苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, BT）芽孢的生物活性微胶囊。作为原理验证，作者使用表面显示增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的 BT 芽孢，以空间定位方式将 EGFP 芽孢封装在微胶囊内。通过微流控液滴聚焦法制备尺寸和形状均一的 BT 芽孢微滴，并经水...
本文报道了一种在表面等离子共振（SPR）金芯片上固定化蛋白质的有效方法，以增强绿色荧光蛋白（EGFP）为模型蛋白，结合半胱氨酸介导的定向固定与寡聚化域介导的多聚化，实现方向可控的高表面密度堆积。为诱导 EGFP 寡聚化，作者选用源自 GCN4 亮氨酸拉链结构域的二聚化和三聚化构建体，用于组装多聚 EGFP。为实现方向控制，采用 C ...