Investigating the ligand agonism and antagonism at the D
多巴胺 D2 受体（D2R）是 G 蛋白偶联受体，其信号转导涉及多种组分。传统 D2R 配体筛选常通过定量 cAMP 或受体与 β-arrestin 相互作用等特定第二信使/效应器读出，而无标记生物传感器技术动态质量再分布（DMR）可提供复杂细胞反应的整体读出，但各信号通路对 DMR 信号的贡献通常不清楚。本研究将 DMR 技术成功...
cAMP assay for GPCR ligand characterization: application of BacMam expression system.
环磷酸腺苷（cAMP）是多种G蛋白偶联受体（GPCR）的第二信使，细胞内cAMP水平变化常被用于评估GPCR特异性配体的生物活性。FRET生物传感器已用于cAMP检测，其比率敏化发射（SE）检测可在荧光微孔板读仪上实施，但需要细胞表达足够且可重复的传感器蛋白。本章介绍利用BacMam杆状病毒转导系统实现cAMP FRET生物传感器（...
Chemical cell-surface receptor engineering using affinity-guided, multivalent organocatalysts.
催化剂有望作为化学蛋白质修饰工具，但催化剂或催化反应在蛋白质中的应用近期才开始，主要限于体外。通过显著改进我们此前报道的亲和引导DMAP（4-二甲基氨基吡啶，AGD）催化剂，本文发展了一种基于有机催化剂的新方法，可在活细胞表面受体蛋白上实现特异性化学酰化。催化剂由一组多价DMAP基团（酰基转移催化剂）与靶蛋白特异性配体融合而成。体外...
Pharmacological characterization of membrane-expressed human trace amine-associated receptor 1 (TAAR1) by a bioluminescence resonance energy transfer cAMP biosensor.
痕量胺是一类神经递质，近年发现其可结合中枢神经系统中广泛表达的新型G蛋白偶联受体（GPCR）家族——痕量胺相关受体（TAAR）。人TAAR1在模型细胞中膜表达极差，严重限制其药理学表征。本研究显示，在人TAAR1 N端插入人α2-肾上腺素受体前9个氨基酸所形成的天冬酰胺糖基化位点，足以使其在HEK-293细胞质膜上表达，从而可用新型...