Control of CCR5 Cell-Surface Targeting by the PRAF2 Gatekeeper.
新合成的G蛋白偶联受体（GPCR）向细胞表面靶向需在内质网出口位点（ERESs）被募集进入COPII囊泡，该过程可受escort蛋白促进或gatekeeper蛋白滞留调控。PRAF2是内质网驻留四跨膜蛋白，作为GABAB受体GB1亚基的gatekeeper，识别其C端串联二亮氨酸/RXR滞留基序。PRAF2也曾通过双杂交与趋化因子受...
Optogenetic Microwell Array Screening System: A High-Throughput Engineering Platform for Genetically Encoded Fluorescent Indicators.
基因编码荧光指示剂（GEFI）是一类蛋白基光遗传工具，在细胞和组织中结合特定配体时改变荧光强度，可用于监测细胞生理响应。然而，开发具有生理敏感性和药理学特异性的 GEFI 常需通过反复试错突变并在体外逐一评估其生物物理功能，蛋白巨大突变空间使开发缓慢，尤其依赖哺乳动物宿主系统时。为此，作者开发了多路复用高通量工程平台 Opto-MA...
Peptide Variant Detection by a Living Yeast Biosensor via an Epitope-Selective Protease.
本研究将真菌信息素蛋白酶重新引入活酵母生物传感器，用于识别并区分仅含单氨基酸差异的肽配体。作者以工程化酿酒酵母为平台，整合真菌 G 蛋白偶联受体（GPCR）、内源信息素信号通路以及荧光蛋白或番茄红素可见读出模块，并组成型分泌对应信息素蛋白酶。通过剂量响应实验，系统表征了酿酒酵母、白念珠菌、裂殖酵母、八孢裂殖酵母和日本裂殖酵母五种信息...
REGA-SIGN: Development of a Novel Set of NanoBRET-Based G Protein Biosensors.
尽管G蛋白偶联受体（GPCR）是重要治疗靶点，许多GPCR的信号特性仍不清楚。GPCR激活主要启动异源三聚体G蛋白信号。为检测配体诱导的G蛋白激活，此前已开发基于生物发光共振能量转移（BRET）的生物传感器。本文设计了一套新型NanoLuciferase（NLuc）BRET生物传感器REGA-SIGN，覆盖全部Gα家族（Gαi/o、...
Computational design of dynamic receptor-peptide signaling complexes applied to chemotaxis.
工程化蛋白生物传感器以高灵敏度响应特定生物分子并触发精确细胞反应，是诊断与合成细胞生物学的重要目标。以往设计多依赖结合结构明确分子；将柔性化合物识别与预期细胞响应耦合可拓展应用。本文提出一种计算策略，用于设计构象动态蛋白与肽之间的信号复合物。为验证方法，作者构建了超敏感趋化受体—肽对，可在原代人T细胞中引发强信号响应和显著趋化。与传...
GPCR Signaling Measurement and Drug Profiling with an Automated Live-Cell Microscopy System.
时间序列荧光显微镜结合荧光生物传感器是量化单活细胞信号时空动态的有力工具，但实验通量低。为克服该限制，作者开发了基于 MATLAB 的 FALCOscope（Flexible Automated Liquid-handling Combined Microscope）平台，协调 OpenTrons 液体处理机器人和荧光显微镜，实现药...