基于 Förster/荧光共振能量转移（FRET）的基因编码生物传感器是研究细胞和组织内信号分子时空调控的通用工具。开发蛋白激酶 FRET 生物传感器最困难的任务之一是鉴定可用于 FRET 探针的激酶特异性底物肽。为解决该问题，我们利用激酶相互作用底物筛选（KISS）技术推导目标蛋白激酶的共识底物序列。本文表明，由 KISS 鉴定的...
嗅鞘细胞（OECs）是嗅觉系统中具有形态和功能可塑性的胶质细胞，培养条件下可呈现扁平型和突起型两种表型，且二者可相互转化，但调控其形态可塑性的分子机制尚不清楚。本研究利用RhoA荧光共振能量转移（FRET）生物传感器发现，活性RhoA主要分布于OECs的片足和/或丝状伪足，而非胞体；局部破坏这种活性RhoA分布可使细胞由扁平型转变为...
跨内皮迁移（TEM）是白细胞从血管进入组织的受调控过程，Rho GTP 酶参与该过程，但各成员贡献不明。本研究用 RNA 干扰筛选鉴定影响 T 细胞 TEM 的 Rho GTP 酶，证明 RhoA 对该过程至关重要。RhoA 缺失导致迁移极性丧失：细胞缺乏前缘和尾足结构，转而形成稳定的窄突起，且突起与收缩事件去极化分布。通过成像 R...
本文报道了一种高亲和力双底物荧光探针ARC-583（Adc-Ahx-(D-Arg)6-D-Lys(5-TAMRA)-NH2），并描述了其在荧光偏振/各向异性结合与置换实验中的应用，用于表征cAMP依赖性蛋白激酶PKA和Rho激酶ROCK的ATP竞争性抑制剂及蛋白/肽底物竞争性抑制剂。该探针与PKA的结合解离常数为0.48 nM，因而...
Rho GTP酶是调控细胞形态和肌动蛋白细胞骨架的关键分子开关。已有研究表明，Rac1和Cdc42分别调控迁移细胞前缘的板状伪足和丝状伪足形成，而RhoA主要介导细胞后部收缩；但近期报道发现迁移细胞前缘存在RhoA/ROCK激活区。本研究利用基于FRET的RhoA生物传感器，在EGF刺激的MTLn3癌细胞中实时监测RhoA活性，发现...